Способ приготовления комплексного культурального антигена для лабораторной диагностики вируса гриппа птиц типа А

Скачать PDF файл.

Формула / Реферат

Изобретение относится к области ветеринарии, точнее, к диагностике инфекционных заболеваний птиц. Предлагаемый способ получения специфического культурального антигена включает заражение перевиваемой культуры клеток почки собак (МДСК), выращенной в 1,5-литровых матрасах стационарным методом, эпизоотическим штаммом «А/домашний гусь/Павлодар/2/05» H5N1 вируса гриппа птиц типа А с последующим концентрированием клеточной фракции в 100-кратно меньшем объеме, термолизисом, центри-фугированием, инактивацией 0,1% формалином.

Текст

Смотреть все

(51) 01 33/531 (2010.01) 12 7/06 (2010.01) 12 1/93 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ КОМПЛЕКСНОГО КУЛЬТУРАЛЬНОГО АНТИГЕНА ДЛЯ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСА ГРИППА ПТИЦ ТИПА А(57) Изобретение относится к области ветеринарии,точнее, к диагностике инфекционных заболеваний птиц. Предлагаемый способ получения специфического культурального антигена включает заражение перевиваемой культуры клеток почки собак (МДСК), выращенной в 1,5-литровых матрасах стационарным методом, эпизоотическим штаммом А/домашний гусь/Павлодар/2/05 51 вируса гриппа птиц типа А с последующим концентрированием клеточной фракции в 100 кратно меньшем объеме,термолизисом,центрифугированием,инактивацией 0,1 формалином.(72) Мамадалиев Сейдигапбар Мамадалиевич Кошеметов Жумагали Каукарбаевич Матвеева Валентина Михайловна Ажибаев Азамат Жасуланович Хайруллин Берик Мухитович(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Научноисследовательский институт проблем биологической безопасности Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан 19986 Изобретение относится к области ветеринарии,точнее к лабораторной диагностике инфекционных заболеваний птиц. Известен способ приготовления антигена при гриппе птиц типа А, включающий применение вируссодержащей аллантоисной суспензии, для получения которой используют в основном 10-10 суточные развивающиеся куриные эмбрионы, что требует соблюдения специальных ветеринарносанитарных мер предосторожности и применения дополнительных методов концентрации и очистки(Соловьев В.Д., Неклюдова Л.И., Федорова Ю.Б. и др. Оценка чувствительности иммунопреципитации для серодиагностики гриппозно-бактериальных пневмоний. Вопросы вирусологии. Медицина.-1977.-1). В доступной нам отечественной и зарубежной литературе нет сведений о способах приготовления культурального антигена для лабораторной диагностики вируса гриппа птиц типа А. Задачей изобретения является получение высокоактивного культурального антигена вируса гриппа птиц типа А, пригодного для постановки реакции диффузионной преципитации (РДП) и иммуноферментного анализа (ИФА). Способ приготовления специфического антигена для лабораторной диагностики вируса гриппа птиц типа А, предусматривает заражение культуры клеток МДСК, выращенной в 1,5-литровых матрасах стационарным методом, эпизоотическим штаммом А/домашний гусь/Павлодар/2/05 51 вируса гриппа птиц типа А, культивирование на поддерживающей питательной среде,центрифугирование вируссодержащей суспензии,ресуспендирование полученного осадка клеток в 100-кратном объеме физиологического раствора,термолизис и центрифугирование, после чего надосадочную жидкость инактивируют 1-ным раствором формалина. Предлагаемый нами способ приготовления культурального антигена для лабораторной диагностики предусматривает получение вируссодержащего материала из эпизоотического штамма А/домашний гусь/Павлодар/2/05 51 вируса гриппа птиц типа А, выделенного на территории Павлодарской области Республика Казахстан. По предлагаемому способу 1-2-суточную перевиваемую культуру клеток почки собак МДСК,выращенную в 1,5 литровых матрасах, с полным монослоем заражали осветлнной АЖ ВГП типа А штамма А/домашний гусь/Павлодар/2/05 51 с биологической активностью 8,01 ЭИД 50 в дозе 2 мл с титром гемагглютинации 11024. Вирус с клетками выдерживали в течение 1 ч при 37 С, покачивая матрасы через каждые 15 минут. Затем в матрасы вносили поддерживающую питательную среду(ПСП), содержащую 1 глютамина, 5 нормальной сыворотки крупного рогатого скота и по 100 ед/мл антибиотиков. Матрасы выдерживали в термостате при температуре 37 С,ежедневно просматривая матрасы под микроскопом на наличие цитопатического действия вируса (ЦПД). По истечении 48-72 ч при поражении монослоя клеток вирусом на 80-90 клетки снимали механически стерильным шпателем. Приготовленную таким образом культуральную вируссодержащую суспензию центрифугировали при 2000 об/мин в течение 30 минут, надосадок выбрасывали, а осадок клеток ресуспендировали в 100-кратном объме стерильного физиологического раствора. Для выхода вируса из клеток, полученную суспензию трхкратно замораживали при -40 С в течение 5-6 ч и оттаивали при комнатной температуре, то есть проводили термолизис клеток. Затем суспензию осветляли центрифугированием при 4000-5000 об/мин в течение 20-30 минут, осадок клеток отбрасывали, а надосадок использовали в качестве антигена. Затем специфический антиген инактивировали формалином в конечной концентрации 0,1 в течение 3 суток при 37 С. Приготовленный таким образом антиген исследовали на активность и специфичность в серологических тестах. Активность антигена составила 1512 в РГА, 18 в РДП и 112800 в ИФА. В готовую суспензию антигена вносили антибиотики (пенициллин и стрептомицин) по 1000 ед/мл и раствор желатина до конечной концентрации 0,5. Суспензию хорошо перемешивали, выдерживали в течение 1 ч при комнатной температуре, разливали в ампулы по 0,51 мл и подвергали лиофильному высушиванию. Приготовленный по данному способу культуральный антиген применяли для постановки РГА, РДП и методов ИФА при диагностике ВГП типа А в различных испытуемых материалах. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ приготовления специфического антигена для лабораторной диагностики вируса гриппа птиц типа А, отличающийся тем, что заражают культуру клеток МДСК, выращенную в 1,5-литровых матрасах стационарным методом, эпизоотическим штаммом А/домашний гусь/Павлодар/2/05 51 вируса гриппа птиц типа А, культивируют на поддерживающей питательной среде,центрифугируют вируссодержащую суспензию,полученный осадок клеток ресуспендируют в 100 кратном объеме физиологического раствора,подвергают термолизису и центрифугированию,после чего надосадочную жидкость инактивируют 0,1-ным раствором формалина.

МПК / Метки

МПК: C12N 7/06, C12R 1/93, G01N 33/531

Метки: комплексного, гриппа, диагностики, приготовления, способ, лабораторной, вируса, культурального, птиц, антигена, типа

Код ссылки

<a href="http://kzpatents.com/2-19986-sposob-prigotovleniya-kompleksnogo-kulturalnogo-antigena-dlya-laboratornojj-diagnostiki-virusa-grippa-ptic-tipa-a.html" rel="bookmark" title="База патентов Казахстана">Способ приготовления комплексного культурального антигена для лабораторной диагностики вируса гриппа птиц типа А</a>

Похожие патенты