Способ получения единого бруцеллезного антигена для рк, рск и рдск

Скачать PDF файл.

Формула / Реферат

Изобретение относится к ветеринарии, аименно к технологии производства единогобруцеллезного антигена для выявления бруцеллезасельскохозяйственных животных. Способизготовления единого бруцеллезного антигенапутем культивирования на среде, содержащейэритрит-агар с добавлением 0,02 % цистина и 0,02 %дрожжевого экстракта, культивирование проводятв течение 48 часов при температуре 37 °С, смывомкультуры 0,5 %-ным раствором фенола, инактивациейпри 80 °С в течение 60 минут, титрацией антигена сдоведением до титра в РА до 1:5 и РСК до 1:150. Способизготовления единого бруцеллезного антигенапозволяет повысить активность целевогопродукта, снизить себестоимость ипродолжительность изготовления препарата.

Текст

Смотреть все

КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к ветеринарии, а именно к технологии производства единого бруцеллезного антигена для выявления бруцеллеза сельскохозяйственных животных. Способ изготовления единого бруцеллезного антигена путем культивирования на среде,содержащей эритрит-агар с добавлением 0,02 цистина и 0,02 дрожжевого экстракта,культивирование проводят в течение 48 часов при температуре 37 С, смывом культуры 0,5 -ным раствором фенола, инактивацией при 80 С в течение 60 минут, титрацией антигена с доведением до титра в РА до 15 и РСК до 1150. Способ изготовления единого бруцеллезного антигена позволяет повысить активность целевого продукта,снизить себестоимость и продолжительность изготовления препарата.(72) Иванов Николай Петрович Ахметсадыков Нурлан Нуролдинович Хусаинов Дамир Микдатович(56) Касьянов А.Н., Сапегина Е.П. Получение единого бруцеллезного антигена для РА, РСК и РДСК // Ветеринария. 1973,10, с. 50-52(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЕДИНОГО БРУЦЕЛЛЕЗНОГО АНТИГЕНА ДЛЯ РК, РСК И РДСК 14292 Изобретение относится к ветеринарии, а именно к технологии производства единого бруцеллезного антигена для выявления бруцеллеза сельскохозяйственных животных. Известен способ изготовления единого бруцеллезного антигена для РА, РСК и РДСР путем культивирования штамма 19 на плотной питательной среде(печеночномартеновский агар на переваре Хоттингера) в течение 72 часов, отделения бактериальных клеток с последующим их в фенолизированном физиологическом растворе, определение активности целевого продукта проводят путем подсчета концентрации микробных клеток (Касьянов А.Н.,Сапегина Е.П. Получение единого бруцеллезного антигена для РА, РСК и РДСК // Ветеринария, 1973, 10, с. 50-52). Однако этот способ не обеспечивает достаточного накопления бруцелл,является трудоемким, длительным. Задачей является разработка способа получения единого бруцеллезного антигена для РК, РСК и РДСК, обеспечивающего повышение активности целевого продукта, снижение себестоимости и продолжительности изготовления препарата. Это достигается путем культивирования на среде, содержащей эритрит-агар с добавлением 0,02 цистина и 0,02 дрожжевого экстракта,культивирование проводят в течение 48 часов при температуре 37 С, смывов культуры 0,5 -ным раствором фенола, инактивацией при 80 С в течение 60 минут, титрацией антигена с доведением до необходимого титра. Способ приготовления единого бруцеллезного антигена осуществляется следующим образом. Пример. Бруцеллы вида овис, например,вакцинный штамм Вг.19 или другие виды бруцелл, высевают на твердую питательную среду(эритрит-агар) с добавлением 0,02 цистина и 0,02 дрожжевого экстракта, помещенную в посевную четверть. Посев культуры производят путем увлажнения питательной среды посевным материалом, для чего используют 2-суточную агаровую культуру бруцелл. Засеянные четверти помещают в термостат при температуре 37 С на 48 часов. После окончания выращивания культуру смывают стерильным 0,5 -ным фенолизированным физиологическим раствором с рН 7,0-7,2 из расчета 35-50 мл на одну бутыль. Смытую культуру сливают в бутыли по 10 л и прогревают при 80 С в течение 60 минут. Прогретую суспензию проверяют на чистоту и стерильность путем микроскопии мазков,окрашенных по Грамму и Козловскому, и высева на МПБ, МПА, печеночно-мартеновский агар и бульон с переваром Хоттингера, МППБ под вазелиновым маслом и среду Сабуро по две пробирки и два флакона с 50 мл бульона на каждый образец. За высевами наблюдают в течение 10 дней. Активность антигена в РА стандартизируют по национальной стандартной агглютинирующей сыворотке антибруцелла абортус, содержащей в 1 мл 1000 международных единицантител. 2(сухую стандартную сыворотку) растворяют дистиллированной водой, а затем разводят 0,5 -ным фенолизированным физиологическим раствором 1150, 1200, 12540,1300 и 1350. Полученные разведения сыворотки хранят в стерильных флаконах. Концентрат антигена разводят 0,5 -ным фенолизированным физиологическим раствором 13 13,5 14 и т. д. до 116. Каждое разведение антигена испытывают со всеми пятью разведениями стандартной сыворотки при одинаковой дозировке ингредиентов, равной 0,5 мл. При этом после добавления антигена к сыворотке в каждой пробирке будет по 1 мл смеси,соответствующей конечным разведениям сыворотки 1300, 1400, 1500, 1600, 1700. Одновременно антиген испытывают с негативной сывороткой в разведении 125, 150 и 0,5-ным фенолизированным физиологическим раствором. Пробирки встряхивают, выдерживают в термостате при температуре 37 С в течение 23 ч и затем при комнатной температуре 1 ч. Реакцию агглютинации учитывают в соответствии с наставлением по постановке и учету РА при диагностике бруцеллеза сельскохозяйственных животных. При учете определяют то разведение антигена,которое с конечным разведением стандартной сыворотки 1500 дает 50 агглютинации . С негативной сывороткой и физиологическим раствором реакции должны быть отрицательными. В зависимости от результатов титрации концентрированную суспензию разводят стерильным 0,5-ным фенолизированным раствором и тщательно смешивают. Отбирают пробу и ставят РА с разведениями антигена 14,5 15 15,5. Антиген в разведении 15 с конечным разведением стандартной агглютинирующей сыворотки 1500 должен дать 50 агглютинации. Активность антигена в РСК определяют титрованием по квадратной схеме со стандартной бруцеллезной агглютинирующей сывороткой в разведениях 1100, 1125, 1150, 1175, 1200. Одновременно антиген испытывают с негативной сывороткой в разведениях 15 и 110. Антиген(стандартизированную в РА взвесь бруцелл) разводят 150, 1100, 1150, 1200, 1300, 1400. Комплемент и гемолизин берут в рабочих титрах,эритроциты - 2,5 от осадка. Сыворотку инактивируют 30 минут при температуре 58-60 С. Предельным титром антигена считают то его разведение, которое дает полную задержку гемолиза с наибольшим разведением стандартной бруцеллезной сыворотки. За рабочий титр антигена в РСК принимают двойную дозу его предельного титра. Антиген выпускают, если в РА его разведение 15 с конечным разведением стандартной бруцеллезной сыворотки 1500 дает 50 агглютинациив РСК - дает полную задержку гемолиза со стандартной бруцеллезной сывороткой в ее предельном титре при разведении антигена не ниже, чем 1150. 14292 Приготовленную серию антигена стерильно разливают по 20 мл в 20-миллилитровые флаконы из нейтрального стекла, закрывают стерильными резиновыми пробками металлическими колпачками. Сравнительные данные по технологии получения антигена Существующая (способ) технология получения Печеночно-мартеновский агар на переваре Хоттингера,расфасованный в посевные четверти. Выход антигена с 1 л питательной среды 0,7 л Культивирование в термостате при 37 С 72 часа Слив конденсата из четвертей Смыв культуры 0,5 фенолизированным физраствором Сбор культуры в 10 л стеклянные емкости Инактивация антигена в водяной бане или реакторе при 80 С 60 мин Доведение концентрации до 30 млн. м.к. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения единого бруцеллезного антигена для РК, РСК, РДСК, включающий культивирование штамма 19 на плотной питательной среде,отделение бактериальных клеток, их инактивирование, Предлагаемая технология (способ) получения Среда эритрит-агар с добавлением 0,02 цистина и 0,02 дрожжевого экстракта. Выход антигена с 1 л питательной среды 1,0 л Культивирование в термостате при 37 С 48 часов Нет Смыв культуры 0,5 фенолизированным физраствором Сбор культуры в 5-10 л стеклянные емкости Инактивация антигена в водяной бане или реакторе при 80 С 60 мин Титрация и доведение титра до 15 в РА и до 1150 в РСК суспендирование в фенолизированном физиологическом растворе, определение активности и концентрации целевого продукта, отличающийся тем, что культивирование проводят на эритрит-агаре с добавлением 0,02 цистина и 0,02 дрожжевого экстракта в течение 48 часов, а определение активности и концентрации целевого продукта проводят путем титрации в РА и РСК.

МПК / Метки

МПК: A61K 39/10

Метки: единого, рдск, способ, рск, рк, бруцеллезного, получения, антигена

Код ссылки

<a href="http://kzpatents.com/3-14292-sposob-polucheniya-edinogo-brucelleznogo-antigena-dlya-rk-rsk-i-rdsk.html" rel="bookmark" title="База патентов Казахстана">Способ получения единого бруцеллезного антигена для рк, рск и рдск</a>

Похожие патенты