Штамм бактерий micrococcus roseus 34-2 для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов

Скачать PDF файл.

Формула / Реферат

Изобретение относится к области биотехнологии и экологии и касается получения нового штамма нефтеокисляющих бактерий, который может быть использован для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов.
Задачей изобретения является получение штамма бактерий с более высокой нефтеокисляющей активностью, устойчивого к сублимационному высушиванию.
Техническим результатом является получение нового штамма бактерий Micrococcus roseus 34-2 , включение которого в состав препаратов для очистки почв от нефти и нефтепродуктов позволит повысить их эффективность за счет повышенного содержания в них жизнеспособных клеток на 1 порядок и более высокой нефтеокисляющей способности (на 14-22 %).

Текст

Смотреть все

(51) 12 1/20 (2006.01) 09 1/10 (2006.01) 12 1/265 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(76) Саданов Аманкелди Курбанович Гаврилова Нина Николаевна Ратникова Ирина Александровна Шорабаев Ерик Жарылкасынович(54) ШТАММ БАКТЕРИЙ 34-2 ДЛЯ ОЧИСТКИ ПОЧВЫ ОТ НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ нового штамма нефтеокисляющих бактерий,который может быть использован для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов. Задачей изобретения является получение штамма бактерий с более высокой нефтеокисляющей активностью, устойчивого к сублимационному высушиванию. Техническим результатом является получение нового штамма бактерий 34-2,включение которого в состав препаратов для очистки почв от нефти и нефтепродуктов позволит повысить их эффективность за счет повышенного содержания в них жизнеспособных клеток на 1 порядок и более высокой нефтеокисляющей способности (на 14-22). Изобретение относится к области биотехнологии и экологии и касается получения нового штамма нефтеокисляющих бактерий, который может быть использован для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов. В настоящее время для очистки окружающей среды от нефтяных загрязнений используются биопрепараты на основе активно разлагающих нефть микроорганизмов бактерий родов, , , дрожжей , нитевидных актиномицетов , грибовии др. (Демьяненко А.Ф., Мизгирев Н.С. Микробиологическая очистка грунтов от нефтепродуктов в закрытых реакторах изотермического типа // Вестник ВНИИЖТ, 2005,6). Создание высокоэффективных биопрепаратов для очистки объектов окружающей среды от нефти и нефтепродуктов возможно лишь на основе активных углеводородокисляющих микроорганизмов и ассоциаций, адаптированных к условиям загрязнения, и разработки оригинальной технологии их производства с учетом физиологических особенностей штаммов. Известен штамм нефтеокисляющих бактерий М.34, выделенный из нефтезагрязненной почвы Атырауской области (Предварительный патент РК 19848, используемый для очистки почв от нефти и нефтепродуктов, 2008, бюл. 8 19843). Штамм входит в состав препарата Бакойл(Инновационный патент РК 24879. Препарат Бакойл- для очистки почв от нефти и нефтепродуктов/ Саданов А.К., Айткельдиева С.А.,Гаврилова Н.Н., Ратникова И.А. от 12.01.2011.,бюл.12.). Задачей изобретения является получение штамма бактерий с более высокой нефтеокисляющей активностью, устойчивого к сублимационному высушиванию. Поставленная задача достигается получением нового штамма М.34-2 с повышенной нефтеокисляющей активностью и устойчивостью к сублимационному высушиванию. Штамм выделен из популяции М.34 после 3-кратного сублимационного высушивания. Штамм М.34-2 представляет собой кокки,одиночные, в парах и в скоплениях, размером 1,25 2,0 мкм Грамположительные,некислотоустойчивые, спор не образуют. На МПА и РПА культура образует округлые, выпуклые колонии красного цвета, диаметром 1-2 мм. Край колоний ровный, пигменты в среду не выделяет. Аэроб. При росте в МПБ происходит помутнение среды, выпадает осадок, на поверхности образуется кольцевидная пленка. В качестве источника углерода использует глюкозу, лактозу, маннозу. Крахмал не гидролизует,желатину не разжижает. Сероводород и индол не образует. Нитраты восстанавливает до нитритов. Штамм дает положительную реакцию на каталазу и оксидазу. Характеризуется высокой способностью к утилизации нефти и нефтепродуктов. Штамм бактерий М.34-2 депонирован в коллекции Института микробиологии и вирусологии МОН РК под номером ИМиВ В-32. Сущность изобретения поясняется следующими конкретными примерами. Пример 1 Культуры микроорганизмов М.34 и 34-2 выращивают в модифицированной питательной среде ВД (Ворошилова-Дианова) следующего состава,43 - 1,0 К 2 НР 4 - 1,0 КН 2 Р 4 1,0 4 - 0,2 СаС 2 - 0,02 3 - 2 капли концентрированного раствора,- 10,0 глюкоза - 1,0 питательный бульон - 1,0 сырая нефть 0,1 вода - остальное,среды - 6,8-7,0. Жидкую питательную среду засевают упомянутыми культурами микроорганизмов(каждую отдельно) в количестве 5 смывом с косяков МПА (п.108 КОЕ/мл) и культивируют на качалке в течение 1 суток при температуре 28 С. Полученный посевной материал индивидуальных штаммов засевают в ферментационную питательную среду того же состава и выращивают в аэробных условиях в течение 2 суток. После окончания ферментации в культурах определяют титр бактерий путем высева из соответствующих разведений на поверхность плотной питательной среды МПА. Подсчет колоний производят на 3-4 сутки после термостатирования при 28-30 С. Нефтеокисляющую активность устанавливают гравиметрическим методом при росте культур в среде ВД с 2 нефти на качалке в течение 10 суток. Полученные результаты представлены в таблице 1. Таблица 1 Титр и нефтеокисляющая активность различных штаммов бактерий при росте в модифицированной среде ВД Штаммы бактерий Установлено, что предлагаемый штамм М.34-2 при выращивании в модифицированной питательной среде ВД превосходит противопоставляемый штамм М.34 по 2 накоплению бактериальных клеток на 1 порядок, по нефтеокисляющей активности - на 22. Пример 2 Культуры микроорганизмов М.34 и 34-2 выращивают в питательной среде с соевой мукой следующего состава, КН 2 Р 4 - 2,0 24 - 3,0 4 - 0,5 (4)24 - 2,0 СаС 2 - 0,01, 3 0,05 соевая мука - 5,0, сахароза - 10,0, вода - до 1 л, 6,8-7,2. Жидкую питательную среду засевают упомянутыми культурами микроорганизмов(каждую отдельно) в количестве 5 смывом с косяков МПА (п.108 КОЕ/мл) и культивируют на качалке в течение 1 суток при температуре 28 С. Полученный посевной материал индивидуальных штаммов засевают в ферментационную питательную среду того же состава и выращивают в аэробных условиях в течение 2 суток. После окончания ферментации в культурах определяют титр бактерий путем высева из соответствующих разведений на поверхность плотной питательной среды МПА. Подсчет колоний производят на 3-4 сутки после термостатирования при 28-30 С. Нефтеокисляющую активность устанавливают гравиметрическим методом при росте культур в среде ВД с 2 нефти на качалке в течение 10 суток. Полученные результаты представлены в таблице 2. Таблица 2 Титр и нефтеокисляющая активность различных штаммов бактерий при росте в питательной среде с соевой мукой Штаммы бактерий Установлено, что предлагаемый штамм М.34-2 при выращивании в питательной среде с соевой мукой превосходит противопоставляемый штамм М.34 по накоплению бактериальных клеток на 1 порядок, по нефтеокисляющей активности - на 16,9. Пример 3 Получение сухого препарата. Выращивание бактерий проводят аналогично примеру 1. Для осаждения биомассы в жидкую культуру добавляют 3 бентонита. Через 2-3,5 ч биомассу, адсорбированную на бентоните, отделяют от культуральной жидкости центрифугированием. В бактериальную пасту добавляют 0,5 тиомочевины,разливают в специальные металлические лотки слоем не более 1,0 см. Лотки помещают в морозильную камеру и замораживают при температуре - 40-50 С в течение 6 часов. Высушивают в сублимационной сушилке 35. Температура досушивания продукта 25 С,разряжение 45 Па. Показатели качества сухих препаратов из различных штаммов бактерий представлены в таблице 3. Таблица 3 Содержание жизнеспособных клеток бактерий в сублимационно высушенных препаратах и их нефтеокисляющая активность Штаммы Титры культур, КОЕ/г до высушивания после высушивания 2,61011 1,21012 11 8,010 9,71012 Наибольшее количество жизнеспособных клеток выявлено в препарате из культуры М.34-2(9,71012 КОЕ/г по сравнению с 1,21012 КОЕ/г). Препарат из штамма М.34-2 утилизировал нефть на 97, из штамма М.34 - на 83. Таким образом, штамм бактерий М.34-2 превосходит штамм М.34 по накоплению бактериальных клеток на 1 порядок, по утилизации нефти - на 14-22. Нефтеокисляющая активность сухих препаратов, 73,0 97,0 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм бактерии 34-2,депонирован в коллекции ИМиВ МОН РК, под номером ИМиВ В-32, предназначенный для включения в состав препаратов для очистки почв от нефти и нефтепродуктов.

МПК / Метки

МПК: C12N 1/20, B09C 1/10, C12R 1/265

Метки: почвы, нефти, бактерий, штамм, micrococcus, очистки, roseus, нефтепродуктов

Код ссылки

<a href="http://kzpatents.com/3-30870-shtamm-bakterijj-micrococcus-roseus-34-2-dlya-ochistki-pochvy-ot-nefti-i-nefteproduktov.html" rel="bookmark" title="База патентов Казахстана">Штамм бактерий micrococcus roseus 34-2 для очистки почвы от нефти и нефтепродуктов</a>

Похожие патенты