Штамм бактерий Bifidobacterium longum 1R для приготовления бактерийных препаратов, нормализующих микрофлору человека

Скачать PDF файл.

Формула / Реферат

Изобретение относится к биотехнологии и касается нового штамма пробиотических бактерий Bifidobacterium longutn 1R и может быть использован для приготовления бактерийных препаратов, нормализующих м и крофлору человека.
Данный штамм отвечает предъявленным требованиям. Штамм проявляет высокую антимутагенную активность, отличается высокой устойчивостью к антибиотикам.
Штамм Bifidobacterium longum 1R проявляет высокую антимутагенную активность к мутагенам МММ и 2-11Ф, а также резистентность к антибиотикам ципрофлоксацин (500 мкг/мл) и амоксициллип (200 мкг/мл).

Текст

Смотреть все

(51) 12 1/20 (2010.01) 61 35/74 (2010.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к биотехнологии и касается нового штамма пробиотических бактерий 1 и может быть использован для приготовления бактерийных препаратов, нормализующих м и крофлору человека. Данный штамм отвечает предъявленным требованиям. Штамм проявляет высокую антимутагенную активность, отличается высокой устойчивостью к антибиотикам. Штамм 1 проявляет высокую антимутагенную активность к мутагенам МММ и 2-11 Ф, а также резистентность к антибиотикам ципрофлоксацин (500 мкг/мл) и амоксициллип (200 мкг/мл).(72) Кистаубаева Аида Сериковна Савицкая Ирина Станиславовна Жубанова Ажар Ахметовна(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Казахский национальный университет им. аль-Фараби Министерства образования и науки Республики Казахстан 1 ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ БАКТЕРИЙНЫХ ПРЕПАРАТОВ,НОРМАЛИЗУЮЩИХ МИКРОФЛОРУ ЧЕЛОВЕКА 25084 Изобретение относится к биотехнологии и касается нового штамма пробиотических бактерий 1 и может быть использован для приготовления бактерийных препаратов, нормализующих микрофлору человека. Известен штамм 4 используемый для получения, бифидосодержащих препаратов эубиотиков и продуктов лечебнодиетического питания (Патент РФ 2151606 С 1 МПК С 12 1/20, 61 35/74, опубликован 27.06.2000),однако недостатком известного штамма является недостаточно высокая биологическая активность и технологичность. Задачей заявляемого изобретения является получение штамма 1 антибиотикорезистентного и антимутагенного пробиотика. Техническим результатом заявленного изобретения является повышение антимутагенной активности и аптибиотикорезистентности пробиотического штамма 1. Технический результат достигается использованием штамма 1 в качестве нового антибиотикорезистентного и аитимутагенного пробиотика. Предлагаемый штамм получен путем многолетней селекции исходной культуры. выделенной из кишечника человека на питательной среде Блаурокка с возрастающими концентрациями антибиотиков и воздействием УФЛ (лампа БУВ-15, доза облучения 3900 эрг/мм 2). Отобран по высокой скорости роста,высокой антимутагениой активности и устойчивости к антибиотикам,таким как ципрофлоксацин и амоксици ллин. Морфология В мазках клетки расположены в форме китайских иероглифов, имеют вид прямых или разветвленных палочек с У-образпыми раздвоениями на одном или обоих концах, иногда образуют утолщения на концах. Неподвижны, в мазке располагаются беспорядочно. Грамположительны,иногда внутри клеток выявляется зернистость. Спор не образуют. Величина клеток 1,0-3,0 мкм. Метаболизм хемогетеротрофным метаболизмом,облигатные анаэробы. Культуральные признаки Для размножения штамма 1 используется среда КДС (казенно-дрожжевая среда) при температуре инкубации 37, 48 часов. Состав среды КДС г/л натрий хлористый - 5,0 г/л,лактоза 10,0 г/л,-цистеин солянокислый - 0,1 г/л,агар микробиологический - 0,75 г/л,дрожжевой автолиза - 650 мл/л,панкреотический гидролизат казеина с конечной концентрацией аминного азота - 350 мл/л,режим стерилизации - 30 минут, при 112. Хранение на среде Блаурокка при температуре 4, при температуре инкубации 37, 48 часов. Питательная среда Блаурокк г/л- 10,0 Натрий хлористый - 5,0 Магний хлористый 0,2 Цисте и солянокислый - 1,0 Твин-80- 1,0 Агарагар - 0,75 рН 7,20,2, стерилизация при 121 - 15 мин. Перед употреблением разливают по пробиркам (в количестве 9,0 мл) и регенерируют кипячением 30 минут. Хранение в лиофильно-высушенном состоянии при температуре не выше 0 на защитной среде ЖСМС. Состав защитной среды ЖСМС (желатиносахарозо-молочная среда)желатин - 15-20,сахароза - 5-10, молоко- 50-70, стерилизация 30 минут, при 112 С. Физиологические и биохимические свойства Продукт синтезируемый штаммом микроцин. 1 обладает антагонистической активностью в отношении тесткультур зона угнетения роста тест-штаммов 60 - 223,177 59-60-275,. -13 - 192. Штамм апатогенен, не обладает гемолитической,лецитиназной, иротеолитической, фосфатазной,ДНК-азной и РПК-азыой активностью, а также не проявляет мутагенного действия в тесте Эймса. Штамм 1 депонирован в ДГП Республиканская коллекция микроорганизмов (г. Астана) под номером 0241 от 06.03.2009 г. Сущность изобретения подтверждаемся следующими конкретными примерами использования штамма 1. Пример 1. Определение антимутагенной активности в тесте Эймса. Для этого использовали индикаторные штаммыТА 98,ТА 100, ТА 1535, ТА 1538. Суспензию клеток тест-штамма предварительно инкубировали с фекальными экстрактами в течение 2 часов при 37, затем клетки отмывали от него и высевали на чашки с селективной средой. Изучение протекторных свойств культуральных экстрактов бактерий проводили в трех вариантах. Первый вариант включал совместное добавление супермутагена и бесклеточного фильтрата в слой верхнего агара. Во втором случае, для определения десмутагенного действия - мутаген предварительно инкубировали с фильтратом культуральной жидкости или клетками, затем 0,3 мл смеси добавляли к суспензии клеток тест-штамма и производили посев на селективные чашки. В третьем варианте,для определения биоантимутагениого действия, было предусмотрена предобработка клеток тестерного штамма с бактериальным антимутагеном-модулятором с последующим действием мутагена. Бактериальную суспензию инкубировали вместе с антимутагеном 40 минут. После инкубации смесь центрифугировали, осадок ресуспендировали и использовали в опыте. Обработанную таким образом культуру и раствор мутагена вносили в слой верхнего полуобогащенного агара. Чашки 25084 инкубировали 48 часов при 37, после чего подсчитывали количество колоний-ревертантов в опытных и контрольных чашках. Получение микросомальной фракции -9 проводили в соответствиями с рекомендуемыми Методическими указаниями по первичному выявлению генетической активности среды с помощью бактериальных тест-систем. В экспериментах с метаболической активацией в реакционную систему добавляли 10 мкл микросомальной активирующей смеси,без активации -аликвоты растворителя. Эффективность антимутагенного действия рассчитывали по формуле Ингибирование(а - ) х 100 / (а - с), где а - число гистидиновых ревертантов, индуцированных под действием мутагена число гистидиновых ревертантов,индуцированных под действием мутагена в присутствии антимутагена,с - число ревертантов, вырастающих в присутствии только антимутагена и выражали в процентах,отражающих степень угнетения генотоксичсского эффекта мутагенов. Принято считать, что антимутаген может быть перспективным для использования,если оказываемое им протекторное действие снижает уровень индуцированного мутагенеза не менее чем на 50. В связи с этим штамм 1, уровень антимутагенной активности которого превосходил этот показатель более чем на 50, считается высокоактивным (таблица 1). Пример 2. Получение антибжпикорезистентного штамма 1. Устойчивый к антибиотику штамм 1, получали путем УФ-мутагенсза. В качестве мутагенного фактора использовали УФ-лучи, источником которых служили две лампы БУВ-15, смонтированные параллельно и заключенные в футляр. Доза облучения 3900 эрг/мм 2. Выживаемость облученных культур при таком режиме составляла 0,1-1, которая является оптимальной для индукции мутаций. Облучению УФ-лучами подвергали водную суспензию 24 часовой культуры (плотность К) клеток/мл). Облучение проводили в открытой чашке Петри,перемешивание осуществлялось с помощью магнитной мешалки. Отбор антибиотикорезистентного штамма проводили методом отпечатков. Определение уровня чувствительности к антибиотикам проводили методом серийных разведений. После облучения степень устойчивости к ципрофлоксацину (500 мкг/мл) у бифидобактерий штамма 1 увеличилась в 4 раза, кроме того, после такой обработки этот штамм приобрел устойчивость к антибиотику амоксициллину (200 мкг/мл)(таблица 2). В связи с этим штамм . 1 может быть использован не только для лечения, но и для профилактики дисбактериоза при лечении ципрофлоксацином. Таблица 1 Антимутагенная активность культуральной жидкости 1 против мутагенов в тесте Эймса с метаболистической активацией Вариант опыта Среднее число ревертантов на чашку Среднее число ревертантов на чашку Примичание Кж- культуральная жидкость штамма 1 АМЭ - антимутагенный эффект НММ - -нитрозо- - метилмочевина 2-НФ - 2-нитрофлуорен. Таблица 2 Уровень резистентности к антибиотикам после облучения ультрафиолетом Штаммы 25084 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм бактерий с 1,депонирован в ДГП Республиканская коллекция микроорганизмов под номером - 0241, для приготовления бактерийных препаратов,нормализующих микрофлору человека.

МПК / Метки

МПК: A61K 35/74, C12N 1/20

Метки: longum, микрофлору, бактерийных, нормализующих, приготовления, препаратов, штамм, бактерий, человека, bifidobacterium

Код ссылки

<a href="http://kzpatents.com/4-25084-shtamm-bakterijj-bifidobacterium-longum-1r-dlya-prigotovleniya-bakterijjnyh-preparatov-normalizuyushhih-mikrofloru-cheloveka.html" rel="bookmark" title="База патентов Казахстана">Штамм бактерий Bifidobacterium longum 1R для приготовления бактерийных препаратов, нормализующих микрофлору человека</a>

Похожие патенты