Штамм клубеньковых бактерий Rhizobium leguminosarum (Lens) А-2 П, используемый для получения бактериального препарата под чечевицу

Скачать PDF файл.

Текст

Смотреть все

(51) 12 1/20 (2006.01) 05 11/08 (2006.01) 01 1/06 (2006.01) 01 21/00 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ использовано в сельском хозяйстве в качестве бактериального удобрения. Задачей изобретения является получение нового штамма клубеньковых бактерий, используемого для получения бактериального препарата под чечевицу,адаптированного для почв Казахстана под современные сорта чечевицы и обладающего высокой азотфиксирующей способностью и конкурентной способностью. Указанная задача решается за счет того, что для бактериального препарата под чечевицу используется новый штамм клубеньковых бактерийА-2 П. Предложен новый штамм клубеньковых бактерийА-2 П,применяемый в качестве средства для получения удобрения под чечевицу. ШтаммА-2 П обладает высокой конкурентной способностью и азотфиксирующей активностью, изученными на сорте чечевицы,районированном в почвенно-климатических условиях Казахстана.(76) Саданов Аманкелди Курбанович Треножникова Людмила Петровна Ултанбекова Гульнар Даулетбаевна Шорабаев Ерик Жарылкасынович(54) ШТАММ КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙА-2 П,ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОГО ПРЕПАРАТА ПОД ЧЕЧЕВИЦУ(57) Изобретение относится к микробиологическим средствам повышения урожайности бобовых растений и предназначено для изготовления бактериального препарата клубеньковых бактерий под чечевицу. Изобретение может быть Изобретение относится к микробиологическим средствам повышения урожайности бобовых растений и предназначено для изготовления бактериального препарата клубеньковых бактерий под чечевицу. Изобретение может быть использовано в сельском хозяйстве в качестве бактериального удобрения. Предложен новый штамм клубеньковых бактерийА-2 П,применяемый в качестве средства для получения удобрения под чечевицу. ШтаммА-2 П обладает высокой конкурентной способностью и азотфиксирующей активностью, изученными на сорте чечевицы,районированном в почвенно-климатических условиях Казахстана. Изобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству и касается нового штамма клубеньковых бактерий А-2 П для получения микробиологического удобрения, повышающего урожайность чечевицы. Клубеньковые бактерии рода способны инфицировать молодые корни бобовых растений, образуя клубеньки, в которых бактерии осуществляют фиксацию атмосферного азота и его биотрансформацию в формы, доступные для растений и микроорганизмов. Клубеньковые бактерии обладают видовой специфичностью, их вирулентность в значительной мере зависит от почвенно-климатических условий. В настоящее время для повышения урожайности бобовых культур используют бактериальные удобрения,изготовляемые на основе азотфиксирующих клубеньковых бактерий Нетрусова А.И. Практикум по микробиологии под редакцией. - М..2005.С.116-129 Известен штамм клубеньковых бактерий чечевицы 724 для промышленного производства бактериальных препаратов под чечевицу. Штамм депонирован и хранится в коллекции ВНИИСХМ под 724(С 12 1/20, С 12 141), опубликовано 23.12.88). Недостатком является то, что указанный штамм отбирался и испытывался на сортах чечевицы,культивируемых в России, применительно к местным почвенно-климатическим условиям. При этом отсутствуют данные по азотфиксирующей способности,конкурентоспособности и эффективности штамма в почвенно-климатических условиях основных регионов культивирования чечевицы в Казахстане. Задачей изобретения является получение нового штамма клубеньковых бактерий, используемого для получения бактериального препарата под чечевицу,адаптированного для почв Казахстана под современные сорта чечевицы и обладающего высокой азотфиксирующей способностью и конкурентной способностью. Указанная задача решается за счет того, что для бактериального препарата под чечевицу используется новый штамм клубеньковых бактерийА-2 П. 2 ШтаммА-2 П выделен из клубеньков чечевицы, произрастающей на посевах Акмолинской области в ТОО Бастау. Штамм депонирован в коллекции РГП Институт микробиологии и вирусологии КН МОН Республики Казахстан (коллекционный номер ИМиВ В-24 от 27.08.2014) и предназначен для получения бактериального препарата под чечевицу с высокой азотфиксирующей активностью и конкурентной способностью клубеньковых бактерий. ШтаммА-2 П характеризуется следующими морфологокультуральными и физиолого-биохимическими признаками. Морфологические и культуральные признаки. Культура неспороносная, грамотрицательная,клетки имеют палочковидную форму, подвижны. Штрих на среде с бобовым отваром обильный,слизистый, светло-кремовый. Колонии на среде с бобовым отваром появляются на 2-3 сутки. Колонии полупрозрачные, приподнятые, слизистые, округлые с ровными краями, диаметр колоний 0,3-0,6 см. Размер клетки 3-суточной культуры на модифицированной среде - 0,5-0,91,2-3,0 мкм. Палочки в молодом возрасте подвижные,монотрихи. Бактероиды имеют вид более крупных палочек, чем клетки в молодом возрасте. Физиологические признаки. Штамм является аэробом,растет в температурном интервале 15-35 С, температурный оптимум 26-28 С при рН 6-7. Оптимум рН 7,0-7,2. Рост на МПА слабый. А-2 П растет на средах, состав которых приведен в таблице 1. Растет на средах с углеводами, подщелачивая среду. Активно использует глюкозу, лактозу,мальтозу, сорбит, сахарозу, слабее - маннит, очень слабо - ксилозу. Растет на средах с аммонийными солями,азотнокислым калием. Молоко с лакмусом не пептонизирует,подщелачивает, образуя небольшую слизистую зону на поверхности. Желатин не разжижает, клетчатку не использует. Признаки штамма устойчивы. Он не патогенен. Пересевается 1 раз в 6 месяцев и хранится на среде с бобовым отваром при 4-5 С. Штамм А-2 П идентифицирован по Определителю Берги (2009) как штамм вида. Изобретение поясняется следующими примерами. Пример 1 Проведен подбор оптимальной среды для накопления биомассы штамма А-2 П. Результаты опытов приведены в табл. 1. ШтаммА-2 П инкубировали в колбах Эрленмейера объемом 750 мл с 200 мл среды в течении 48 часов на орбитальном шейкере при 180-200 об/мин и температуре 281 С. Оптимальной для роста штаммаА-2 П является среда с бобовым отваром, на которой титр клеток достигает 1,50,14 х 109 КОЕ/мл. Наиболее высокий титр клеток (6,20,27109 КОЕ/мл) наблюдается на этой среде при использовании сахарозы в концентрации 8,0 г/л (табл. 2). Глюкоза и глицерин также стимулируют рост штаммаА-2 П. Глюкоза обеспечивает максимальный титр клеток (3,50,13109 КОЕ/мл) в концентрации 4,0 г/л,глицерин(1,80,21109 КОЕ/мл) в концентрации 10,0 г/л. Разработан оптимальный вариант модифицированной среды с бобовым отваром для роста и максимального накопления биомассы штамма клубеньковых бактерий чечевицыА-2 П (титр клеток 6,20,10109 КОЕ/мл). Состав модифицированной среды с бобовым отваром, г/л КН 2 РО 4 - 1,0 472 - 0,3 СаСО 3 - 4,0 сахароза - 8,0 горох -507,0. Пример 2 Конкурентоспособность штамма А-2 П определяли методом генетического маркирования. Исследуемый штаммА-2 П культивировали на минерально-растительной среде(МРС) с возрастающими (от 20 до 1000 ед/мл) дозами антибиотика (стрептомицина или канамицина). Полученные резистентные варианты использовали для проведения вегетационных исследований. На каждый вариант вегетационного опыта сеяли по 100 штук семян. Для исследования использовали сорт чечевицы Веховская. Перед инокуляцией семена стерилизовали смесью этанола и перекиси водорода(11) и промывали трехкратно стерильной водой. Клубеньки, взятые с корней бобовых растений, в возрасте не менее 5 недель, стерилизовали и помещали в стерильную чашку Петри с водой. В стерильные чашки Петри предварительно разливали среду МРС (минерально-растительная среда) без антибиотика и, отдельно, такую же среду, но с 1000 ед. стрептомицина на мл среды. Состав среды МРС, (г/л) К 2 НР 4-0,5 КН 2 Р 4-0,5 472 0,1 4 - 0,1- 0,2 (4)672442 следы маннит или глюкоза - 20,0 соевая мука 10,06,8 - 7,0. На 2 чашки Петри со стрептомицином (1000 ед/мл) и 1 чашку без антибиотика (контроль) стерильно пинцетом размещали клубеньки и раздавливали, делая поверхностный мазок. Предварительно под чашки Петри подкладывали расчерченные шаблоны на 25 гнезд. Итого на одной чашке анализировали 25 клубеньков. Инкубирование исследуемых чашек проводили в течение 7-10 дней. С одного варианта анализировали по 50 клубеньков. После этого подсчитывали количество клубеньков, давших рост клубеньковых бактерий на обычной среде и среде со стрептомицином. Результаты рассчитывали по формуле КС 100/0. Величину конкурентной способности выражали в процентах. Азотфиксирующую активность штамма А-2 П изучали ацетиленовым методом. Результаты опытов приведены в табл. 3. Конкурентная способность штаммаА-2 П равна 46, азотфиксирующая активность составляет 13,5 нмоль 24/ч/1 млн. клеток клубеньковых бактерий. На опытных участках в Алматинской области(НИИ КИЗ) при инокуляции семян чечевицы штаммомА-2 П высота растений увеличивается на 4,8, накопление зеленой массы на 5,1, количество клубеньков возрастает на 20,0 для одного растения. В Акмолинской области при использовании штаммаА-2 П для чечевицы показано увеличение урожайности на 3,3 ц/га, прибавка к контролю составляет 41,3,массовая доля белка в зерне увеличивается от 27,5(контроль) до 32,4 (опытный вариант) (ТОО Достык). Таким образом, штаммА-2 П может быть использован для получения бактериального препарата под чечевицу,адаптированного для почв Казахстана. Штамм проявляет высокий уровень роста на модифицированной среде с бобовым отваром,активно фиксирует атмосферный азот, обладает высокой конкурентной способностью и проявляет эффективность в полевых экспериментах. Таблица 1 Среды для роста и накопления биомассы штамма клубеньковых бактерий чечевицыА-2 П Питательные среды Исварана Лазарева Среда с бобовым отваром Среда с кукурузным экстрактом Грэхема Фреда Норриса МРС Мазэ Минимальная среда Морфологические признаки колоний Полупрозрачные, приподнятые, слизистые,округлые с ровными краями, диаметр колоний 0,3-0,6 см Таблица 2 Влияние источников углерода на рост и накопление биомассы штаммаА-2 П Углеводы Сахароза Морфологические признаки колоний Полупрозрачные, приподнятые, слизистые,округлые с ровными краями диаметр колоний 0,3-0,6 см Полупрозрачные, приподнятые, слизистые,округлые с ровными краями диаметр колоний 0,3-0,6 см Полупрозрачные, приподнятые, слизистые,округлые с ровными краями диаметр колоний 0,3-0,6 см Полупрозрачные, приподнятые, слизистые,округлые с ровными краями диаметр колоний 0,3-0,6 см Полупрозрачные, приподнятые, слизистые,округлые с ровными краями диаметр колоний 0,3-0,6 см Таблица 3 Азотфиксирующая активность и конкурентная способность штаммаА-2 П Наименование штаммаА-2 П Нитрогеназная активность, нмоль Конкурентоспособность,С 2 Н 4/ч/ 1 млн. клеток клубеньковых бактерий 13,50,14 46,00,19 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Штамм клубеньковых бактерийА-2 П, депонированный в коллекции РГП Институт микробиологии и вирусологии КН МОН РК под регистрационным номером ИМиВ В-24, используемый для получения бактериального препарата под чечевицу.

МПК / Метки

МПК: C12N 1/20, A01C 1/06, A01P 21/00, C05F 11/08

Метки: получения, rhizobium, используемый, бактерий, чечевицу, клубеньковых, leguminosarum, препарата, штамм, lens, бактериального

Код ссылки

<a href="http://kzpatents.com/4-30607-shtamm-klubenkovyh-bakterijj-rhizobium-leguminosarum-lens-a-2-p-ispolzuemyjj-dlya-polucheniya-bakterialnogo-preparata-pod-chechevicu.html" rel="bookmark" title="База патентов Казахстана">Штамм клубеньковых бактерий Rhizobium leguminosarum (Lens) А-2 П, используемый для получения бактериального препарата под чечевицу</a>

Похожие патенты