Способ одновременного получения аллергена и антигена для РА и РСК при диагностике бруцеллеза сельскохозяйственных животных

Номер инновационного патента: 20487

Опубликовано: 15.12.2008

Автор: Хусаинов Дамир Микдатович

Скачать PDF файл.

Формула / Реферат

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к технологии производства аллергенов и антигенов для выявления бруцеллеза сельскохозяйственных животных.
Способ одновременного получения аллергена и антигена для РА и РСК при диагностике бруцеллеза путем ультазвуковой дезинтеграции бруцелл с последующим автоклавированием, центрифугиро-ванием взвеси разрушенных клеток и отделением аллергена из надосадочной жидкости, а антигена из осадка.
Способ позволяет повысить выход и активность целевого продукта.

Текст

Смотреть все

(51) 61 39/10 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ РСК ПРИ ДИАГНОСТИКЕ БРУЦЕЛЛЕЗА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ(57) Изобретение относится к ветеринарии, а именно к технологии производства аллергенов и антигенов для выявления бруцеллеза сельскохозяйственных животных. Способ одновременного получения аллергена и антигена для РА и РСК при диагностике бруцеллеза путем ультазвуковой дезинтеграции бруцелл с последующим автоклавированием, центрифугированием взвеси разрушенных клеток и отделением аллергена из надосадочной жидкости, а антигена из осадка. Способ позволяет повысить выход и активность целевого продукта.(72) Иванов Николай Петрович Хусаинов Дамир Микдатович, Иванов Николай Петрович , Хусаинов Дамир Микдатович(56) Н.П. Иванов. Применение ультразвука для приготовления диагностических препаратов из бруцелл. Сборник научных трудов. Алма-Ата, 1985,с.16-26(54) СПОСОБ ОДНОВРЕМЕННОГО ПОЛУЧЕНИЯ АЛЛЕРГЕНА И АНТИГЕНА ДЛЯ РА И 20487 Изобретение относится к ветеринарии, а именно к технологии производства аллергенов и антигенов для выявления бруцеллеза сельскохозяйственных животных. Известен способ получения антигенов путем обработки взвеси микроорганизмов ультразвуком при частоте 0,5-1,5 МГц и интенсивности 5-7 Вт/см 3 в течение 5-10 мин. Полученный таким образом антиген содержит большое количество липидов,белков и токсинов, снижающих его специфичность(Авторское свидетельство СССР 946040, Кл. А 61 К 39/10, 1982 (непубликуемое). Известен также метод дезинтеграции микроорганизмов ультразвуком при непрерывном охлаждении суспензии в замкнутой системе при частоте 40-50 кГц при амплитуде 60-80 Мкм в течение 15-20 мин. (Иванов Н.П. Применение ультразвука для приготовления диагностических препаратов из бруцелл/Меры борьбы с инфекционными, паразитарными и незаразными болезнями сельскохозяйственных животных в Казахстане//Сб. научн. Трудов. Алма-Ата, 1985.-с. 16-26.). Однако этот способ не обеспечивает высокой серологической активности антигена. Целью изобретения является повышение выхода и активности целевого продукта. Эта цель достигается путем ультразвуковой дезинтеграции бруцелл с последующим автоклавированием, центрифугированием взвеси разрушенных клеток и отделением целевого продукта, при этом отделение аллергена проводят из надосадочной жидкости, а антигена из осадка. Пример приготовления аллергена и антигена для РСК при диагностике бруцеллеза животных. Пример 1. Бруцеллы вида , например шт. -1, или другие штаммы бруцелл, выращенные на плотном амипопептидном или печеночно-сывороточном агар-агаре,смывают стерильным физиологическим раствором поваренной соли и дважды отмывают им же от остатков питательной среды. Затем доводят до концентрации 80-100 млрд. микробных тел (по бруцеллезному стандарту мутности) 0,02-ным раствором трис-буфера или 1/15 М раствором двузамещенного фосфорно - кислого натрия. Полученную взвесь подвергают воздействию ультразвуковых волн (с помощью ультразвукового диспергатора УЗДН-1 или УЗДН-2 при частоте 22 кГц, мощности 60 Вт/см 2) в течение 15-20 мин до просветления. По окончании дезинтеграции в микробную суспензию добавляют 20-ный раствор трихлоруксусной кислоты или соляной кислоты до рН 6,8-7,1 и подвергают автоклавированию при 1 атм. 30 мин. Выпавший после автоклавирования осадок отделяют центрифугированием. Надосадок используют в качестве аллергена после разведения 11, а осадок доводят до половины (1/2) первоначального объема указанными буферными растворами и используют в качестве антигена для РСК. Установлено, что полученные описанным способом препараты мелкодисперсных белковых частиц обладают способностью вызвать аллергическую реакцию организма животных, а крупнодисперсные белковые частицы могут использоваться в качестве антигена для РСК/РДСК при выявлении бруцеллезной инфекции. Срок годности готового препарата антигена не менее 3 года. Активность и специфичность полученного описанным способом антигена была проверена в лабораторных и производственных условиях. Результаты опытов приведены в табл. 1 и 2. Таблица 1 Сравнительная оценка активности антигена бруцеллезного для РСК биофабричного с антигеном бруцеллезным, полученным из осадка Компонент Антиген Разведение антигена Без анти 25 50 100 200 300 400 500 гена Бр. 110 Биофабричный бруцеллезный Эпид. 15 Эпид. 110 Контроль Из данных табл. 1 видно, что титры испытуемых антигенов были выше, чем у биофабричных препаратов. В силу этого использование в качестве антигена осадка дезинтеграта при получении антигена для выявления бруцеллеза позволяет в два раза повысить эффективность производства. Далее исследованы пробы сывороток крови животных на бруцеллез различными антигенами. Полученные при этом данные приведены в табл.2. 20487 Таблица 2 Результаты исследования проб сывороток крови овец испытуемым и известным антигенами Количество обследованных испытуемый Биофабричный пп. животных антиген антиген Результаты РСК Из неблагополучных отар 74 15 11 Из благополучных отар 74 Результаты РА Из неблагополучных отар 74 14 10 Из благополучных отар 74 Из данных табл.2 видно, что антиген,полученный из осадка, более активен, чем антиген биофабричный бруцеллезный для РА и РСК. Полученные при этом данные указывают на высокую активность и специфичность антигена в серологических реакциях,что позволяет дополнительно выявлять до 20 и более процентов больных бруцеллезом сельскохозяйственных животных. Для подтверждения полученных данных проведен убой 4-х овец, рагировавших только на опытный антиген,при этом выделялась бруцеллезная культура у всех овец, что подтверждает высокую чувствительность указанного препарата. Далее была изучена активность аллергена,полученного из надосадочной жидкости. При этом было установлено, что у полученных описанным способом препаратов сохраняется способность вызывать аллергическую реакцию организма животных, зараженных соответствующим возбудителем, при разведении аллергенов до 1100. Срок годности готового препарата не менее 1 года. Активность и специфичность полученного описанным способом аллергена была проведена в лабораторных и производственных условиях. Полученные при этом данные указывают на высокую активность и специфичность препарата,что позволяет дополнительно выявлять до 30 больных животных. С целью изучения сенсибилизирующих и антигенных свойств ультразвукового бруцеллезного аллергена, 2 группам здоровых кроликов по 5 голов введен подкожно препарат в рабочем разведении в пятикратном диагностическом объеме,т.е. 0,5 см внутрикожно в области средней трети брюшка. Всего было проведено 5 инъекций препарата с интервалом 5 дней. Параллельно после каждого введения брали кровь для серологических исследований, учет аллергических и серологических реакций производили по общепринятым методикам. Во всех случаях получены отрицательные результаты исследований. Таким образом, ультразвуковой аллерген из бруцелл видапри подкожном введении в дозе 0,5 см лабораторным животным (кролики) не проявляет сенсибилизирующих свойств. Эти же свойства изучали на овцах благополучного по бруцеллезу хозяйства. 10 здоровым овцам ввели ультразвуковой бруцеллезный аллерген в рабочем разведении в дозе 0,5 см 3 под кожу нижнего века левого глаза(интрапальпебральная проба). Учет реакций проводили через 48 часов. Все животные реагировали отрицательно. Через 1,5 месяца после инъекции препарата у данных животных была взята кровь для серологических исследований с опытным и официально принятым антигеном. Получены отрицательные результаты. По аналогичной схеме препарат вводили еще 4 раза с интервалом в 205 дней. Таким образом,аллерген был введен баранам и овцам суммарно 5 раз, у всех животных реакция на аллерген на протяжении опыта была отрицательной. После 5-го введения была взята кровь (через 20 дней после последней инъекции аллергена) у всех находящихся в опыте животных. При исследовании сыворотки крови в РСК и РДСК с бруцеллезными антигенами получены также отрицательные результаты. Следовательно, ультразвуковой аллерген из бруцелл не проявляет антигенных и сенсибилизирующих свойств при 5-кратном введении овцам в дозе 0,5 см 3 под кожу нижнего века. Специфичность препарата проверяли в производственных условиях путем сравнения специфической активности ультразвукового бруцеллезного аллергена в сравнении с контрольным бруцеллезным аллергеном (ВИЭВ) и в опытах на исскуственно сенсибилизированных бруцеллами видавцах. Аллергены применяли в палытебральной пробе в дозе 0,5 см. Реакции учитывали через 48 часов. В табл. 3 приведены результаты проверки специфичности препарата, из которой следует, что аллерген обладает достаточно высокой специфичностью. Таким образом, ультразвуковой аллерген из бруцелла видапроявляет более высокую специфическую активность, чем общепринятый аллерген, применяемый для диагностики бруцеллеза овец, и позволяет выявить в неблагополучных отарах дополнительно к общепринятым клиническому и серологическим (РА и РСК) методам до 30 животных, инфицированных возбудителем бруцеллеза овец. 20487 Таблица 3 Сравнительная специфичность аллергена испытуемым и известным Номер опыта Реагировало На испытуемый На контрольной бруцеллин Всего Только на него Всего Только на него 6 3 5 2 Таблица 4 Результаты сравнительного аллергического исследования животных на заболевание, вызываемое бруцеллами вида Показания диагностических тестов ( положительные,сомнительные, - отрицательные) аллергия РДСК клинические ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ одновременного получения аллергена и антигена для РА и РСК из бруцелл для диагностики бруцеллеза путем ультразвуковой дезинтеграции бруцелл с последующим автоклавированием, центрифугированием взвеси разрушенных клеток и отделением целевого продукта, отличающийся тем, что с целью повышения активности целевого продукта, отделение аллергена проводят из надосадочной жидкости, а антигена из осадка.

МПК / Метки

МПК: A61K 39/10

Метки: сельскохозяйственных, получения, животных, одновременного, диагностике, рск, бруцеллеза, антигена, способ, аллергена

Код ссылки

<a href="http://kzpatents.com/4-ip20487-sposob-odnovremennogo-polucheniya-allergena-i-antigena-dlya-ra-i-rsk-pri-diagnostike-brucelleza-selskohozyajjstvennyh-zhivotnyh.html" rel="bookmark" title="База патентов Казахстана">Способ одновременного получения аллергена и антигена для РА и РСК при диагностике бруцеллеза сельскохозяйственных животных</a>

Похожие патенты