Консорциум молочнокислых бактерий Lactococcus lactis 8, Streptococcus lactis 6 и дрожжей Saccharomyces lactis 14C с высокой анатгонистической активностью по отношению к дрожжам рода Candida и плесневым грибам

Скачать PDF файл.

Формула / Реферат

Зец саныраукулактары мен Candida туысыньщ ашыткыларына карсы жогары антагонистж белсендшп бар Lactococcus lactis 8, Streptococcus lactis 6 суткышкылды бактериялары мен Saccharomyces lactis 14С ашыткысынан туратын консорциум.
Консорциум молочнокислых бактерий Lactococcus lactis 8, Streptococcus lactis 6 и дрожжей Saccharomyces lactis 14C с выскокй анатгонистической активностью по отношению к дрожжам рода Candida и плесневым грибам
Авторы изобретения: Саданов А.К., Саубенова М.Г., Олейникова Е.А., Райымбекова Л.Т., Кузнецова Т.В.
Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано как для приготовления молочнокислого диетического напитка при медикаментозном лечении кандидомикозов, так и для получения столовых кисломолочных продуктов профилактического назначения, а также пробиотика, способствующего элиминации патогенных микроорганизмов из желудочно-кишечного тракта человека и животных. Это достигается применением в качестве закваски консорциума молочнокислых бактерий Lactococcus lactis 8, Streptococcus lactis 6 и лактозосбраживающих дрожжей Saccharomyces lactis 14С, обладающего высокой антагонистической активностью по отношению к дрожжам рода кандида и плесневым грибам, развивающимся в кишечнике человека при дисбактериозах, а также условно-патогенным бактериям.
7

Текст

Смотреть все

(51) 12 1/20 (2006.01) 23 9/12 (2006.01) 12 1/225 (2006.01) 12 1/46 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(57) Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано как для приготовления молочнокислого диетического напитка при медикаментозном лечении кандидомикозов, так и для получения столовых кисломолочных продуктов профилактического назначения, а также пробиотика, способствующего элиминации патогенных микроорганизмов из желудочно-кишечного тракта человека и животных. Это достигается применением в качестве закваски консорциума молочнокислых бактерий 6 и лактозосбраживающих дрожжей 14 С, обладающего высокой антагонистической активностью по отношению к дрожжам рода кандида и плесневым грибам, развивающимся в кишечнике человека при дисбактериозах, а также условно-патогенным бактериям.(72) Саданов Аманкелди Курбанович Саубенова Маргарита Габбасовна Олейникова Елена Андреевна Райымбекова Лаура Толеубековна Кузнецова Татьяна Валерьевна(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Институт микробиологии и вирусологии Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан 8,6 И ДРОЖЖЕЙ 14 С ВЫСОКОЙ АНАТГОНИСТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ ПО ОТНОШЕНИЮ К ДРОЖЖАМ РОДАИ ПЛЕСНЕВЫМ ГРИБАМ Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано как для приготовления кисломолочного диетического напитка, рекомендуемого при медикаментозном лечении микозов, так и для получения столовых кисломолочных продуктов профилактического назначения, а также пробиотика, способствующего элиминации дрожжей рода кандида, плесневых грибов и бактерий - возбудителей различных заболеваний из желудочно-кишечного тракта человека и животных. Получен консорциум молочнокислых микроорганизмов,состоящий из бактерий 8,6 и лактозосбраживающих дрожжей 14 С, который характеризуется высокой антагонистической активностью по отношению к дрожжам рода возбудителям кандидомикозов плесневым грибам, являющимся загрязнителями коммерческих молочнокислых продуктов и развивающимся в кишечном тракте человека при дисбактериозах а также к условнопатогенным бактериям. Консорциум молочнокислых бактерий и дрожжей может быть использован в качестве закваски при получении кисломолочных продуктов лечебно-профилактического назначения, а также для производства пробиотика,которые будут использованы для элиминации патогенных дрожжей, плесневых грибов и бактерий возбудителей различных заболеваний из желудочнокишечного тракта человека и животных и нормализации его микрофлоры. Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к производству кисломолочных продуктов как столового, так и лечебно-профилактического назначения, а также пробиотиков. Известен консорциум молочнокислых бактерий-104, -2), обладающий более высокой антагонистической активностью в отношении условно-патогенной и патогенной микрофлоры желудочно-кишечного тракта человека(. , . . 209-, . , а также Вас. ,) по сравнению с монокультурами этих бактерий (Предвар. патент РК 8945, 2000). Однако консорциум не обладает антагонистической активностью по отношению к грибам-возбудителям микозов,в том числе кандидомикозов,развивающимся в желудочно-кишечном тракте при дисбактериозах,а также являющимся загрязнителями коммерческих молочнокислых продуктов. Диаметр зон подавления роста бактериальных тест-культур невелик. Консорциум составлен путем простого смешивания отдельных штаммов молочнокислых бактерий, что не может гарантировать его стабильности при практическом использовании. Известен консорциум микроорганизмов-,АКБ -1,ББ -1,. 2-1 для производства кумыса и шубата(Патент РК 25304, опубл. 20.12.2011, бюл. 12),обладающий способностью подавлять возбудителей кишечных заболеваний (, , . , .), устойчивый к антибиотикам, фагам,содержащий аминокислоты, витамины. Однако он предназначен только для сбраживания кобыльего и верблюжьего молока и противогрибковой активностью не обладает. Известен способ применения молочнокислых бактерий ..для придания противогрибковых свойств ферментированному молочнокислому продукту. Способ предотвращает развитие плесени класса аскомицетов (заявка на изобретение 2010127276/10 Компани Жерве Данонот 10.01.2012). Однако использование этих бактерий способствует подавлению развития только плесени рода . Известен консорциум молочнокислых бактерий и дрожжей (П- 1,-5,13), обладающий высокой антагонистической активностью по отношению к патогенным грибам - возбудителям дерматомикозов,дрожжевым грибам, а также к условно-патогенным бактериям (Предварительный патент РК 37197, 05.02.2002). Консорциум обладает популяционной устойчивостью лишь при соблюдении оптимальных для него условий культивирования, к тому же антагонистическая активность по отношению к дрожжам- основного возбудителя кандидомикозов различной локализации, а также к плесневым грибам, размножающимся в кишечнике человека при дисбактериозах, у данного консорциума выражена слабо. Сущность изобретения заключается в получении консорциума молочнокислых микроорганизмов с высокой активностью подавления роста дрожжейкак основных и наиболее опасных возбудителей кандидомикозов различной локализации, а также плесневых грибов и условнопатогенных бактерий, являющихся засорителями коммерческих молочнокислых продуктов и развивающихся в кишечном тракте человека при дисбактериозах. Консорциум составлен путем подбора вновь выделенных штаммов молочнокислых микроорганизмов,которые,в отличие от подавляющего большинства используемых в молочной промышленности молочнокислых бактерий, не стимулируют роста дрожжей рода кандида. Он состоит из молочнокислых бактерий 8,6, а также дрожжей 14. Штамм 8 выделен из шубата домашнего производства в Талгарском районе Алматинской области и имеет следующую характеристику. Культурально-морфологические признаки неподвижные клетки овальной или сферической формы, размером от 0,5 до 1,5 мкм, располагаются попарно. Грамположительные. Факультативные анаэробы. Развиваются при температуре от 10 до 40,температурный оптимум 30 С. На агаризованном гидролизованном молоке образуют мелкие (0,4-1,2 мм) каплевидной формы колонии с ровным краем с зонами просветления мела. Глубинные колонии имеют форму лодочки или зерна чечевицы. Способны к росту в широком диапазонесреды от 3,0 до 8,8, при высокой концентрации в среде этилового спирта (до 20), а также к росту при 4 в среде. Физиолого-биохимические признаки Штамм является активным кислотообразователем. Молоко свертывает с образованием плотного сгустка с кисловатым приятным запахом. При свертывании молока за 4-7 часов достигается предельная кислотность 120 Т. Сбраживает галактозу, глюкозу,мальтозу и лактозу. Не сбраживает арабинозу,ксилозу, сахарозу, трегалозу, салицин, инулин,глицерол и сорбитол. Значениесреды в жидких средах с глюкозой в конце культивирования составляет 4,0-4,5. Штамм 6 выделен из айрана домашнего производства в Каскеленском районе Алматинской области и имеет следующую характеристику. Культурально - морфологические свойства штамма на мясопептонном агаре образует мелкие,гладкие, блестящие беловатые колонии диаметром 1,5-2,0 мм, край колонии гладкий, профиль возвышенный на агаризованном молочном гидролизате колонии мелкие, белые, гладкие,блестящие с гладким краем, профиль возвышенный,диаметр колонии 0,8-1,5 мм. Овальные кокки размером 1,05-1,5, 1,05-2,1, 1,2-1,4 мкм, в основном,образующие пары и цепочки из 4-6-8 клеток. Бактерии грамположительные, бесспоровые,неподвижные, желатину не разжижают, нитраты не восстанавливают,каталазоотрицательные. Физиолого-биохимические признаки Сбраживает углеводы глюкозу, фруктозу, галактозу, лактозу,сахарозу, мальтозу, арабинозу, маннозу, рамнозу,ксилозу ферментирует спирты - маннит, сорбит,глицерин, дульцит. Не образует индол и сероводород. Молоко свертывает, не пецтонизирует,продолжительность свертывания молока при внесении 10 инокулята 14-16 ч. Кровь не гемолизирует. Факультативный анаэроб, тип брожения гомоферментативное,температура выращивания 20-32 С, оптимум 30 С,среды 6,5-6,8, содержание ГЦ в ДНК варьирует в пределах 33-42 мол . Штамм фагоустойчив. Культура хранится в сублимационно высушенном состоянии в ампулах при температуре 42 С не менее 12 месяцев и в виде молочного сгустка в 12-ном обезжиренном стерильном молоке с ежемесячным пересевом и хранением в бытовом холодильнике при температуре 4-6 С. Штамм 14 С выделен из шубата, домашнего производства в Талгарском районе Алматинской области и имеет следующую характеристику. Культурально-морфологические признаки клетки овальной формы, имеют длину 4,3-6,3 мкм и ширину 2,9-4,6 мкм. Образуют споры,размножаются почкованием. Оптимальная температура роста - 30 С, максимальная - 50 С,минимальная - 15 С. На поверхности сусло-агара колонии белого цвета, крупные, блестящие, в жидкой среде оседают. Хорошо растут в широком диапазонесреды (3,0-9,0), развиваются при концентрациив среде до 4,0 и выдерживают высокие концентрации сахарозы (до 55). Физиолого-биохимические признаки разжижают желатин, растут на этиловом спирте. Способны образовывать до 1,0 об. спирта. Сбраживают глюкозу, сахарозу, лактозу, галактозу, слабо раффинозу не сбраживают ксилозу, мальтозу,арабинозу, декстрины. Более энергично сбраживают лактозу в присутствии 1,5 молочной кислоты в среде, чем при меньшем ее количестве. Усваивают органические кислоты уксусную, молочную,янтарную, яблочную не усваивают винную,лимонную. Получение консорциума консорциум может быть составлен из суспензии клеток 8,6 и дрожжей 14, отобранных по принципу отсутствия у них способности стимулировать рост дрожжей рода кандида. Молочнокислые бактерии выращивают на стерильном обезжиренном коровьем молоке, а дрожжи - на молочной сыворотке. Обезжиренное коровье молоко разливают по 100 мл в колбы на 500 мл и стерилизуют при 0,5 атм 20 мин. Засевают по 2 мл суспензии каждой культуры, закрывают ватными пробками и помещают на 16-17 часов в термостат при 30 С до получения сгустка с кислотностью 80-90 Т. Проводят полунепрерывное культивирование,заключающееся в ежедневном пересеве с постоянным микробиологическим контролем до получения постоянного процентного соотношения клеток микроорганизмов, входящих в смешанную культуру. При соблюдении условий культивирования (30 С) соотношение клеток молочнокислых бактерий 8,6 и дрожжей 14 уже через 10-12 суток устанавливается на уровне 454510. В результате адаптации микроорганизмов друг к другу на уровне метаболитов между ними устанавливаются симбиотические взаимоотношения,что обеспечивает популяционную устойчивость консорциума и позволяет при наработке закваски опустить стадию выращивания отдельных микроорганизмов с последующим объединением их в консорциум. При этом если антагонистическая активность у монокультур молочнокислых бактерий и дрожжей отсутствовала, то полученный консорциум проявил высокую степень ингибирования дрожжей,неидентифицированных грибов, изолированных из кишечного тракта человека при дисбактериозе, а также традиционного набора бактериальных тесткультур. Условия хранения консорциума консорциум сохраняют при 4-5 С на стерильном обезжиренном коровьем молоке после его сбраживания. Пересевы производят через каждые 20 суток. Штаммы,входящие в состав консорциума поддерживают 8 на косяках с агаризованным гидролизованным молоком с пересевом через три недели,6 на обезжиренном коровьем молоке с пересевом через три недели. Дрожжи 14 С хранят на агаризованном сусле или молочной сыворотке и пересевают через 30 суток. Температура хранения 4-5 С. Оптимальные свойства консорциума молочнокислых бактерий и дрожжей воспроизводят при соблюдении тех же условий культивирования,при которых он был отселекционирован. Пример 1. Односуточный консорциум молочнокислых бактерий и дрожжей, состоящий из 8,6 и 14,испытывали на антагонистическую активность по отношению к дрожжам рода кандида возбудителям кандидомикозов различной локализации и плесневым грибам, изолированным при дисбиозах кишечника (ТОО Нутритест), Активность проверяли диффузным методом на среде Сабуро при 30 С в сравнении с теми же показателями у монокультур, входящих в них микроорганизмов. Полученные данные приведены в таблице 1. Таблица 1. Антагонистическая активность консорциума и монокультур молочнокислых микроорганизмов по отношению к дрожжам рода кандида и плесневым грибам Таблица 1. Антагонистическая активность консорциума и монокультур молочнокислых микроорганизмов по отношению к дрожжам рода кандида и плесневым грибам Тест-культуры Средний диаметр зоны подавления роста тест-культуры, мм Консорциум Из данных таблицы 1 можно видеть, что монокультуры молочнокислых бактерий и дрожжей не обладают антагонистической активностью в отношении дрожжей рода кандида и плесневых грибов. Консорциум же, составленный из них,проявляет высокую степень ингибирующей их рост активности. Диаметр зон подавления роста дрожжей - возбудителей кандидомикозов составляет 25-30 мм, Диаметр зон подавления роста плесневых грибов-от 20 до 34 мм в зависимости от штамма. Подавляется также рост неидентифицированных штаммов грибов (диаметр зон подавления их роста от 20 до 25 мм). Пример 2. Односуточный консорциум молочнокислых бактерий 8,6 и дрожжей 14 испытывали на антагонистическую активность по отношению к условно-патогенным бактериям,традиционно используемым при исследовании антагонистической активности молочнокислых бактерий. Таблица 2 Диаметр зон подавления роста бактериальных тест-культур консорциум молочнокислотных бактерий 8,6 и дрожжей 14 С (мм) Тест-культуры Средний диаметр зоны подавления роста тест-культуры, мм Консорциум Средний диаметр зоны подавления роста тест-культуры, мм Консорциум Из данных таблицы 2 можно видеть, что консорциум молочнокислых бактерий и дрожжей обладает высокой антагонистической активностью по отношению к большому набору бактериальных тест-культур. Так диаметр зон подавления роста исследуемых бактериальных организмов колеблется от 20 мм в случае Е.до 29-30 в случае ., . ,и 1 вакцины Ценковского. Достаточно велики также зоны подавления роста бактерий рода ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Консорциум молочнокислых бактерий 8,6 и дрожжей 14, депонированных в коллекции РГП на ПХВ Институт микробиологии и вирусологии КН МОН РК, используемый в качестве закваски при приготовлении диетических кисломолочных напитков и пробиотиков, также используемый для подавления роста и развития дрожжей рода , плесневых грибов,развивающихся в кишечнике человека при дисбактериозах, а также условно-патогенных бактерий.

МПК / Метки

МПК: C12R 1/46, C12R 1/225, A23C 9/12, C12N 1/20

Метки: lactis, грибам, streptococcus, рода, lactococcus, анатгонистической, активностью, дрожжам, высокой, candida, консорциум, отношению, бактерий, плесневым, дрожжей, молочнокислых, saccharomyces

Код ссылки

<a href="http://kzpatents.com/5-ip30122-konsorcium-molochnokislyh-bakterijj-lactococcus-lactis-8-streptococcus-lactis-6-i-drozhzhejj-saccharomyces-lactis-14c-s-vysokojj-anatgonisticheskojj-aktivnostyu-po-otnosheniyu-k-dr.html" rel="bookmark" title="База патентов Казахстана">Консорциум молочнокислых бактерий Lactococcus lactis 8, Streptococcus lactis 6 и дрожжей Saccharomyces lactis 14C с высокой анатгонистической активностью по отношению к дрожжам рода Candida и плесневым грибам</a>

Похожие патенты