Бивалентная инактивированная вакцина против дерматомикозов собак, кошек, пушных зверей и кроликов

Скачать PDF файл.

Формула / Реферат

Изобретение относится к области био-технологии, микологии, микробиологии, иммунологии, а именно противомикологических вакцин и может быть использовано для активной профилактики дерматомикозов собак, кошек, пушных зверей и кроликов.
Технический результат, обеспечиваемый изобретением, выражается в получении стабильной, безвредной и высокоэффективной инактивированной бивалентной вакцины против двух видов возбудителей дерматомикозов.
Бивалентная инактивированная вакцина против дерматомикозов собак, кошек, пушных зверей и кроликов, включающая антиген штамма гриба Microsporum canis, его ресуспензирование солевым раствором натрия хлорида с добавлением геля гидрата окиси алюминия, она дополнительно содержит антиген штамма гриба Trichophyton mentagrophytes F-0316, глицерин и формалин при следующих соотношениях компонентов, мас.%:
антиген из штамма
Microsporum canis F-0318
(1,0 мг белка в 1,0 см3 вакцины) 10,0-15,0
антиген из штамма
Trichophyton mentagrophytes F-0316
(1,0 мг белка в 1,0 см3 вакцины) 10,0-15,0
гель гидрата окиси алюминия
(6%-ный раствор) 8,0-12,0
глицерин
(98° химически чистый) 8,0-12,0
формалин 8,0-12,0
физиологический раствор остальное.

Текст

Смотреть все

(51) 61 39/116 (2006.01) 61 31/10 (2006.01) 12 1/14 (2006.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ инактивированной бивалентной вакцины против двух видов возбудителей дерматомикозов. Бивалентная инактивированная вакцина против дерматомикозов собак, кошек, пушных зверей и кроликов, включающая антиген штамма гриба, его ресуспензирование солевым раствором натрия хлорида с добавлением геля гидрата окиси алюминия, она дополнительно содержит антиген штамма гриба-0316, глицерин и формалин при следующих соотношениях компонентов, мас. антиген из штамма-0318(1,0 мг белка в 1,0 см 3 вакцины) 10,0-15,0 гель гидрата окиси алюминия(72) Умитжанов Мынбай Бижанов Болат Рахметович Боранбаева Райхан Султанмуратовна Арысбекова Алтынай Танибергеновна(54) БИВАЛЕНТНАЯ ИНАКТИВИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ ДЕРМАТОМИКОЗОВ СОБАК, КОШЕК, ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ И КРОЛИКОВ(57) Изобретение относится к области биотехнологии,микологии,микробиологии,иммунологии, а именно противомикологических вакцин и может быть использовано для активной профилактики дерматомикозов собак, кошек,пушных зверей и кроликов. Технический результат,обеспечиваемый изобретением, выражается в получении стабильной,безвредной и высокоэффективной 20955 Изобретение относится к области биотехнологии,микологии,микробиологии,иммунологии, а именно противомикологических вакцин и может быть использовано для активной профилактики дерматомикозов собак, кошек,пушных зверей и кроликов. Известна инактивированная вакцина против дерматомикозов собак, кошек, пушных зверей и кроликов, включая антиген штамма гриба, его ресуспензирование солевым раствором натрия хлорида с добавлением геля гидроокиси алюминия Патент Российской Федерации 2084241, кл. А 61 К 39/00, 1997. Недостатком инактивированной вакцины против дерматомикозов собак, кошек, пушных зверей и кроликов является, то, что она защищает только от одного вида возбудителя дерматомикозной инфекции. Задачей изобретения является повышение иммуногенности вакцины и расширение диапазона эффективности специфической профилактики и лечения дерматомикозов плотоядных животных к разным видам грибов родови. Технический результат, обеспечиваемый изобретением, выражается в получении стабильной,безвредной и высокоэффективной инактивированной бивалентной вакцины против двух видов возбудителей дерматомикозов. Бивалентная инактивированная вакцина против дерматомикозов собак, кошек, пушных зверей и кроликов, включающая антиген штамма гриба, его ресуспензирование солевым раствором натрия хлорида с добавлением геля гидрата окиси алюминия, она дополнительно содержит антиген штамма гриба-0316, глицерин и формалин при следующих соотношениях компонентов, мас. антиген из штамма-0318(1,0 мг белка в 1,0 см 3 вакцины) 10,0-15,0 гель гидрата окиси алюминия(98 химически чистый) 8,0-12,0 формалин 8,0-12,0 физиологический раствор остальное. Штаммы грибов, используемые для изготовления бивалентной инактивированной вакцины против дерматомикозов собак, кошек, пушных зверей и кроликов, депонированы в лаборатории Музей культур микроорганизмов ТОО НИИВ(КазНИВИ) и обладают следующими свойствами. Штамм гриба-0318. Морфологические признаки. Штамм гриба-0318 КазНИВИ 2 обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя микроспории собак. Окрашенные по Грамму культуры гриба грамположительные. 2 Культуральные свойства. Культуры гриба быстрорастущие, рост колонии наблюдается на 2-5 й день в виде маленького пушистого возвышения,окруженный зоной блесоватого пушка к 10-му дню достигают диаметра 4-5 см. Штамм гриба-0318 КазНИВИ 2 ветвящиеся, беловатые, сероватые или бежевые,пушистые, бархатисто-мучнистые, распростертые,овальные, растущий край воздушного мицелия паутинистый. Размеры шириной 0,6-3,5 мкм,септированный,изогнуты,иногда гифы ракетообразные, микроконидии немногочисленные,овальные, грушевидные, размером 3-6 х 2,5-3,5 мкм,сидящие или прикрепленные короткими ножками,встречаются не постоянно, располагаются на конидиеносцах различного размера макроконидии многочисленные,веретеновидной формы с вытянутыми концами, с толстостенной гладкой или зубчатой оболочкой, с 8-12 перегородками, размером 50-120 х 15-25 мкм, располагающихся иногда на равном расстоянии одна от другой по ходу мицелия. Артроспоры гриба единичные или отсутствуют. Хламидоспоры округлые, интеркалярные диаметром 8-12 мкм, располагаются на равном расстоянии друг от друга по ходу мицелия, единичные или отсутствуют. Биохимические свойства. Штамм гриба-0318 КазНИВИ 2 - из углеводов постоянно усваивает сахарозу, глюкозу,мальтозу, манит факторы роста - тиамин,никатиновая,патнтотеновая,парабензойные кислоты. Стимуляторы роста - железа, цинк,марганец, медь, молибден, кальций, кобальт,никель, бор и др. Сероводород и индол не образует. Антигенные свойства. На введение культуры штамма в организме кошек, собак и пушных зверей(кроликов) образуются специфические агглютинины в титрах 140 - 1 1280. Маркерные признаки.Физиологические хемогетеротроф. По отношению к кислороду - аэроб. Пептоны, аспарагин, глутоминовая кислота, сусло агар, аминокислоты, углеводы, сахароза, глюкоза,мальтоза, маннит факторы роста (тиамин,никотиновая, пантотеновая, парабензойная кислоты и др.) стимуляторы роста (железа, цинк, марганец,медь, молибден, кальций, кобальт, никель, бор и др.). Биохимические - на сусло агаре при рН 7,2-7,4 до концентрации 60-145 млн/см 3 макроконидии многочисленные, овальные размером 15-25 х 50-120 мкм микроконидии округлые или грушевидные, иногда продолговатые, размер 3-6 х 2,6-3,5 мкм,встречается не постоянно. Иммунохимические - в реакциях РСК и РНГА титры антител составляет от 140 до 1 1280 отличается от эпизоотических штаммов слабой вирулентностью, высокой спорогенностью и активностью при внутримышечном введении. Патогенные свойства. Штамма гриба-0318 КазНИВИ 2 патогенен для кошек, собак, пушных зверей и мышевидных грызунов. Иммуногенность. При двукратном внутримышечном введении штамм в дозе 20 х 106 20955 макроконидии создает напряженный иммунитет у привитых кошек, собак и пушных зверей (кроликов) к последующему заражению микроспории продолжительностью не менее 12 месяцев. Безвредность. Штамм гриба 0318 КазНИВИ 2 безвреден для кошек, собак и пушных зверей (кроликов) в дозе 20 х 106 макроконидии при внутримышечном введении. Реактогенность. Штамм гриба-0318 КазНИВИ 2 слабореактогенен для кошек,собак и пушных зверей (кроликов) при внутримышечном введении, так как вакцина приготовлена из убитых (инактивированных) клеток дерматофитов. У привитых животных спустя 15-25 дней на месте инъекции развивается небольшой специфически локализованный поверхностный очажок, который самопроизвольно излечивается в течение 2-3 недель. Спорообразование. Максимальный уровень спорообразования на сусло-агаре 60-145 млн/см 3. Реверсабельность и реактогенность. Штамм гриба-0318 КазНИВи 2 отличается от эпизоотических изолятов слабой вирулентностью, отсутствием заражения при контакте между животными, высокой активностью при внутримышечном введении животным. Стабильность свойств при пассировании. Основные биологические свойства штамма гриба-0318 КазНИВИ 2 стабильно сохраняются на протяжении года (при 2-3-х кратном пассаже в течение года) при пассаже культуры на питательных средах (срок наблюдения). Сохраняемость в лиофильно-высушенном состоянии в присутствии жидкого обезжиренного молока или 10 сахарозы и 1,5 желатина штамм гриба-0318 КазНИВИ 2 не снижает активности при температуре 2-10 С в течение 12 месяцев, в нативном состоянии в течение 6 месяцев, в замороженном при минус 40 С в течении 6 месяцев,при минус 20 С ниже в течение 2 лет. После растворения из лиофилизированного состояния физиологическим раствором хлорида натрия или дистиллированной водой с рН 7,2-7,4 гриб сохраняет биологическую активность при температуре 26-28 С в течение 5 часов, при 4 С - 3 сут. Штамм гриба 0316. Морфологические признаки. Молодые клетки штамм гриба окрашивается грамположительно,мицелий ровный, ветвящийся, шириной 0,6-3 мкм,встречаются спиралевидные и кольцевидные окончания гиф. Микроконидии диаметром 2-4 мкм размер макроконидии - 5-10 х 30-45 мкм артроспор отсутствуют хламидиоспоры единичные или отсутствуют. Штамм гриба 0316 имеет неокрашенный ровный, ветвистый,септированный мицелий, распадающихся на фрагменты, терминальные гифы иногда образуют спирали (обычно до 5-х завитков). Микроконидии многочисленные, круглые, реже грушевидные и удлиненные. На сусло-агаре штамм образует хорошо развитые белые, плоские, мучнистые колонии с ровным краем. Макроконидиинемногочисленные, с закругленными концами или отсутствуют. Культуральные свойства. На сусло агаре к 14-му дню формируются колонии белые, желтоватые,розоватые, плоские, ровные, мучнистые, зернистые или бархатистые, растущий край розовый или звездчатый, обратная сторона колонии желтоватая или красно-коричневая, колония покрывает всю поверхность питательной среды. Молодые колонии белые, с возрастом слегка желтеют. Встречаются приподнятые колонии, представленные в основном белым воздушным мицелием. Культура испытывает потребность в витаминах, аминокислотах и минеральных веществах для увеличения роста и спорообразования. Спорообразования. Максимальный уровень спорообразования на сусло-агаре 430,0 млн/см 3. Аэроб. Оптимальная скорость роста при температуре 26-28 С, рН 7,2-7,4. Особенности ультраструктуры. Мицелий ровный ветвящийся диаметром от 0,6-3,0 мкм, встречается спиралевидные и кольцевидные окончания гиф,имеет завитки до 4-5 раз. Микроконидии многочисленные круглые или грушевидные диаметром до 5 мкм,макроконидии немногочисленные с закругленными концами,удлиненно-овальные длиной до 45 мкм разделенный от 3 до 5 клеток. Хламидоспоры редкие, округлые диаметром до 10 мкм. Артроспоры отсутствуют. Биохимические свойства. Ферментативная активность гриба в отношении белков, углеводов и жиров более яркая, чем у других видов дерматофитов. Антигенные свойства. На введение культуры штамма-0316 в организме кроликов образуются специфические агглютинины в титрах 140-11280. Безвредность. Штамм гриба-0316 слабо реактогеннен для кроликов при внутримышечном введении. У привитых животных спустя 14 дней на месте инъекции развивается специфически локализованный, поверхностный очажок диаметром 1,0-2,0 см, который самопроизвольно излечивается в течение последующих 12-15 дней. Иммуногенность. При двукратном внутримышечном введении штамма-0316 в дозе 30 х 106 микроконидии, создается напряженный иммунитет у кроликов к последующему заражению трихофитией, продолжительностью не менее 24 мес. Реверсабельность и реактогенность. Штамм гриба-0316 отличается от эпизоотических штаммов слабой вирулентностью, высокой спорогенностью и активностью при внутримышечном введении животным. Стабильность штамма при пассировании. Основные биологические свойства штамма гриба-0316 стабильно сохраняются на протяжении 5 лет в лиофильно высушенном состоянии(защитная среда обезжиренное молоко) и свыше 6 мес при хранении в 3 20955 нативном состоянии (засеянных на пробирки с суслоагаром) при температуре 2-8 С. После растворения из лиофилизированного состояния физиологическим 0,85 раствором хлористого натрия при рН 7,4 гриб-0316 сохраняет биологическую активность при температуре 26-28 С в течение 6 часов, а при 4 С - 3 сут. Маркерные признаки штамма-0316. Физиологические - хемогетеротроф. Биохимические - из углеводов постоянно и хорошо усваивает сахарозу. Серологические - в реакциях РСК и РНГА титры антител составляет от 140 11280. Патогенные свойства. Штамма-0316 патогенен для диких,домашних и лабораторных животных. Легко инокулируется при втирании культур и патологического материала в кожу, вызывая через 4-5 дней воспалительный процесс с экссудацией,различной толщины корками,сдираемыми животными при сильном зуде очагов поражений. Втирание слабых по вирулентности патогенных штаммов сопровождается более легкими,скоропреходящими поражениями, с незначительным шелушением и покраснением на месте втирания. Пример 1. Для получения бивалентной инактивированной вакцины против дерматомикозов собак, кошек, пушных зверей и кроликов берут 14 сут культуру штамма-0318 и 18 сут культуру штамма 0316, и выращивают раздельно в матровых колбах на сусло-агаре при рН 7,2-7,4 и температуре 26-28 С в течение 18 дней. Выращенную грибницу каждой культуры в условиях асептики снимают с поверхности питательной среды стеклянными грибными скребками и помещают в стерильные банки. На каждый собранный вакцинный штамм добавляем по 300,0 см 3 стерильный физиологический раствор. Грибную массу каждого штамма гомогенизируют в миксерах, затем с помощью стерильного физиологического раствора, полученные грибные гомогенаты 2-х штаммов инактивируют 3 ным формалином и соединяют в равных объемах. Затем дополнительно подвергают разрушению ультразвуком на УЗДН-1 частотой волн 22 кГц,интенсивностью 100 Вт/см 2 в течение 30 мин - 1 часа. После разрушения гомогенная масса помещается в холодильник при температуре 4-8 С в течение 1 сут. Затем берется проба для микроскопического анализа на наличие не разрушенных спор с последующим посевом на питательные среды. После этого берутся 3 пробы для бактериологического и микологического контроля в дозе 1,0 см 3. Далее полученную гомогенную массу центрифугируют при 600 об/мин в течение 20 мин. Верхний слой гомогената необходимо для изготовления бивалентной инактивированной вакцины. С помощью фотоэлектрколориметром определяют концентрацию полученного белка в 1,0 см 3 полученного супернатанта. После к грибной суспензии антигена на солевом растворедобавляют гель гидрата окиси алюминия (8-12) по сухому веществу. 4 Посуточную смесь ставят в термостат до 1 сутки и время от времени перемешивают 3-5 раз. После этого к вакцине добавляют глицерин (98 химически чистый) из расчета 8-12 от объема гомогената. Все тщательно перемешивают, разливают по 2,0 см 3 в стерильные ампулы объемом 2,0-5,0 см 3, запаивают в стерильных условиях с помощью газовой горелки,и этикетируют. Пример 2. Бивалентную инактивированную вакцину против дерматомикозов собак, кошек,пушных зверей и кроликов используют внутримышечно двукратно с интервалом 14 дней при следующем соотношении компонентов, мас. антиген из штамма-0318(1,0 мг белка в 1,0 см 3 вакцины) 10,0 гель гидрата окиси алюминия 8,0(98 химически чистый) 8,0 формалин 8,0 физиологический раствор остальное Пример 3. Бивалентную инактивированную вакцину против дерматомикозов собак, кошек,пушных зверей и кроликов используют так же, как в примере 2 при следующем соотношении компонентов, мас. антиген из штамма-0318(1,0 мг белка в 1,0 см 3 вакцины) 12,0 гель гидрата окиси алюминия 10,0(98 химически чистый) 10,0 формалин 10,0 физиологический раствор остальное Пример 4. Бивалентную инактивированную вакцину против дерматомикозов собак, кошек,пушных зверей и кроликов используют так же, как в примере 2 при следующем соотношении компонентов, мас. антиген из штамма-0318(1,0 мг белка в 1,0 см 3 вакцины) 15,0 гель гидрата окиси алюминия 12,0(98 химически чистый) 12,0 формалин 12,0 физиологический раствор остальное Готовая бивалентная инактивированная вакцина против дерматомикозов собак, кошек, пушных зверей и кроликов представляет собой жидкость коричневато-желтоватого цвета. Вакцина сохраняет 20955 свои биологические свойства при условии хранения в закрытых сухих, темных помещениях при температуре 2-10 С. Срок годности вакцины 12 мес со дня окончании разлива вакцины. Пример 5. Для изучения иммуногенной активности бивалентной инактивированной вакцины против дерматомикозов собак, кошек,пушных зверей и кроликов берут трех групп животных, в каждой из которых находятся трех видов животных (собаки, кошки и кролики). Каждому животному опытной группы вводят внутримышечно по 1,0 см 3 ресуспензированной бивалентной инактивиро-ванной вакцины в область крупа дважды с начало левой, а потом справой стороны бедренным группам мышц с интервалом 14 дней. Спустя 25-28 дней после второй иммунизации,все 15 голов животных трех опытной группы, а также по 3 головы из трех контрольных групп (не иммунизированных животных) экспериментально заражают вирулентными эпизоотическими культурами двух видов культур из родаи . В течение 30-35 дней за опытными и контрольными группами животных ведут наблюдение, а клинический осмотр животных осуществляют через каждые 3-5 дней. От животных с клиникой микроспории и трихофитии отбирают патологический материал. При микроспории и трихофитии делают высевы на питательные среды и уточняют визуально полученный диагноз заболевания данных животных дерматомикозами. При обнаружении у животных микроспории и трихофитии, а также подтверждения диагноза,животных подвергают двух или трехкратному введению терапевтической дозы жидкой инактивированной бивалентной вакцины в тех же интервалах, что и профилактические дозы данного биологического препарата. Результаты проведенной работы учитываются спустя 25-30 дней после второй иммунизации заболевших животных терапевтической дозой бивалентной инактивированной вакциной против дерматомикозов собак,кошек, пушных зверей и кроликов. Результаты иммуногенной активности(профилактической и терапевтической дозы) бивалентной инактивированной вакцины против дерматомикозов собак, кошек, пушных зверей и кроликов отражены в таблицах 1 и 2. Из таблиц 1 и 2 видно, что бивалентная инактивированная вакцина против дерматомикозов собак, кошек, пушных зверей и кроликов при ее проверке на иммуногенную активность проявила высокую профилактическую и терапевтическую эффективность, в том числе и при лечении заболевших животных с явной клинической формой микроспории и трихофитии. Использование предлагаемой вакцины в ветеринарной практике позволит повысить эффективность мероприятий по профилактике и терапии от разных видов возбудителей дерматомикозов плотоядных животных в Республике Казахстан. Таблица 1 Профилактическая эффективность бивалентной инактивированной вакцины против дерматомикозов собак, кошек, пушных зверей и кроликов Вид животных и Количест Результаты опытов (количество заболевших животных при их возраст во голов экспериментальном заражении вирулентными эпизоотическими культурами грибов родови) Не Заболело заболело Диагноз Диагноз не подтвердился подтвердился Опытные группы (дважды иммунизированные животные) Собаки 5 5 Кошки 5 5 Кролики 5 5 Контрольные группы (не иммунизированные животные) Собаки 5 5 5 Кошки 5 5 4 1 Кролики 5 5 5 Таблица 2 Проверка терапевтической эффективности бивалентной инактивированной вакцины против дерматомикозов собак, кошек, пушных зверей и кроликовгруппы Вид животных и их возраст Количест Результаты исследования животных во, голов выздоровело не выздоровело 1 Собаки 5 5 0 2 Кошки 5 5 0 3 Кролики 5 5 0 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Бивалентная инактивированная вакцина против дерматомикозов собак, кошек, пушных зверей и кроликов, включающая антиген штамма гриба 5 20955, его ресуспензироване солевым раствором натрия хлорида с добавлением геля гидрата окиси алюминия, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит антиген штамма гриба-0316, глицерин и формалин при следующих соотношениях компонентов, мас. антиген из штамма-0318 антиген из штамма-0316(1,0 мг белка в 1,0 см 3 вакцины) 10,0-15,0 гель гидрата окиси алюминия

МПК / Метки

МПК: A61P 31/10, C12N 1/14, A61K 39/116

Метки: кошек, вакцина, инактивированная, против, кроликов, бивалентная, зверей, пушных, дерматомикозов, собак

Код ссылки

<a href="http://kzpatents.com/6-ip20955-bivalentnaya-inaktivirovannaya-vakcina-protiv-dermatomikozov-sobak-koshek-pushnyh-zverejj-i-krolikov.html" rel="bookmark" title="База патентов Казахстана">Бивалентная инактивированная вакцина против дерматомикозов собак, кошек, пушных зверей и кроликов</a>

Похожие патенты