Скачать PDF файл.

Формула / Реферат

Использование: медицина и ветеринария, в частности, микробиология и вирусология, а именно производство и применение новых противогрибковых и противовирусных препаратов
Задача: применение в медицинской и ветеринарной практике полиенового антибиотика розеофунгин, полученного из продуцента Streptomyces roseoflavus var. Roseofungini, в качестве малотоксичного лечебного средства, эффективно подавляющего размножение широкого круга возбудителей грибковых инфекций человека и животных, а также различных вирусов.
Сущность изобретения: в качестве лечебного средства с противогрибковой и антивирусной активностью, обладающего способностью подавлять размножение возбудителей грибковых инфекций человека и животных и размножение различных вирусов используется лиофильно высушенный ацетоново-бутанольный экстракт мицелия продуцента Streptomyces roseoflavus var. Roseofungini, содержащий полиеновый антибиотик розеофунгин.
Положительный эффект: преимущества предлагаемого лечебного средства перед существующими заключаются в сочетании эффективного действия против возбудителей широкого спектра грибковых инфекций человека и животных и высокой антивирусной активности в отношении различных вирусов, низкой токсичности, отсутствии резистентности у возбудителей грибковых и вирусных инфекций к новому лечебному средству, доступности препарата для производства в Республике Казахстан. Предлагаемое лечебное средство, позволяет расширить арсенал противогрибковых и противовирусных медицинских и ветеринарных препаратов и может быть использовано в качестве импортозамещающего лекарственного средства.

Текст

Смотреть все

(51) 61 35/74 (2011.01) 61 36/06 (2011.01) 61 31/10 (2011.01) 61 31/12 (2011.01) 12 1/465 (2011.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ возбудителей грибковых инфекций человека и животных, а также различных вирусов. Сущность изобретения в качестве лечебного средства с противогрибковой и антивирусной активностью, обладающего способностью подавлять размножение возбудителей грибковых инфекций человека и животных и размножение различных вирусов используется лиофильно высушенный ацетоново-бутанольный экстракт мицелия продуцента, содержащий полиеновый антибиотик розеофунгин. Положительный эффект преимущества предлагаемого лечебного средства перед существующими заключаются в сочетании эффективного действия против возбудителей широкого спектра грибковых инфекций человека и животных и высокой антивирусной активности в отношении различных вирусов, низкой токсичности,отсутствии резистентности у возбудителей грибковых и вирусных инфекций к новому лечебному средству, доступности препарата для производства в Республике Казахстан. Предлагаемое лечебное средство,позволяет расширить арсенал противогрибковых и противовирусных медицинских и ветеринарных препаратов и может быть использовано в качестве импортозамещающего лекарственного средства.(72) Саданов Аманкелди КурбановичБерезин Владимир ЭлеазаровичНикитина Екатерина ТрофимовнаБалгимбаева Ася Султановна Шакиев Серик ШакиевичТреножникова Людмила ПетровнаБогоявленский Андрей Павлинович(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Институт микробиологии и вирусологии Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан(57) Использование медицина и ветеринария, в частности, микробиология и вирусология, а именно производство и применение новых противогрибковых и противовирусных препаратов Задача применение в медицинской и ветеринарной практике полиенового антибиотика розеофунгин,полученного из продуцента. , в качестве малотоксичного лечебного средства, эффективно подавляющего размножение широкого круга Изобретение относится к области медицины и ветеринарии, в частности микробиологии и вирусологии, а именно к разработке новых противогрибковых и антивирусных препаратов. Потребность в новых противомикробных и антивирусных препаратах постоянно растет. Это обусловлено с одной стороны недостаточным ассортиментом имеющихся на рынке лечебных противомикробных и антивирусных средств, а с другой стороны, их недостаточной эффективностью,токсичностью и возникновением лекарственной устойчивости к имеющимся препаратам. Для лечения микозов, вызывающих тяжелые местные и системные поражения организма человека и животных,используется ряд антибиотиков. Длительное лечение микозов антибиотиками приводит к появлению устойчивых форм возбудителей, что требует постоянного увеличения доз лечебных препаратов. Повышение лечебных доз антибиотика приводит к усилению побочных реакций, а также способствует еще большей лекарственной устойчивости возбудителя. Сходная картина наблюдается при лечении вирусных инфекций. В настоящее время для лечения вирусных инфекций используется около 100 различных препаратов, которые являются модификациями не более 12 биологически активных соединений. Вследствие высокой изменчивости вирусов у них очень быстро развивается адаптация к применяющимся лекарственным средствам, что требует поиска новых более эффективных препаратов. Известен полиеновый противогрибковый антибиотик нистатин, продуцируемый. Это первый специфический противогрибковый антибиотик, известный с конца 40-х годоввека. Обладает способностью подавлять рост дрожжеподобных грибов рода( Е.,.,.., , , 1966, .876-880 ,.. . . . 2000., . 78 . 41-58). Недостатком данного антибиотика является низкая эффективность в отношении возбудителей грибковых инфекций вследствие его длительного применения и возникновения устойчивых штаммов. Обладает достаточно высокой токсичностью, не применяется системно. Не обладает антивирусной активностью. Известен полиеновый противогрибковый антибиотик леворин, продуцируемый. Активен в отношении дрожжеподобных грибов родаи некоторых простейших ( ) ( ,.1997 . 24. 23547).Недостатком антибиотика является высокая токсичность (гепатотоксичность, нефротоксичность,способность провоцировать желудочные и маточные кровотечения). К данному антибиотику выработалась устойчивость у многих грибов рода, вследствие чего его применение часто является малоэффективным. Не обладает антивирусной активностью. Известен полиеновый противогрибковый антибиотик Амфотерицин В, продуцируемый актиномицетом. Оказывает фунгицидное или фунгистатическое действие. Активен в отношении грибов рода , ,,., , а также лейшманий ( ,.30.1990 . 12, . 308-29). Недостатком антибиотика является высокая токсичность и низкая эффективность в отношении многих возбудителей грибковых инфекций. Не обладает антивирусной активностью. Известен противогрибковый антибиотик Тербинафин,являющийся производным аллиламинов. Выпускается под коммерческим названием Ламизил (швейцарский препарат,производства фирмы Сандоз). Обладает выраженным антимикотическим действием в отношении грибов родов , , и менее выраженным действием по отношению к грибам рода . Оказывает фунгицидное действие на дерматомицеты,плесневые грибы и некоторые диморфные грибы, -, - .., 2006 . 20, р 1307 1313). Недостатком препарата является относительно низкая активность по отношению к грибковым инфекциям, вызванным возбудителями родаи высокая стоимость импортного препарата. Не обладает антивирусной активностью. Известен противовирусный препарат на основе нафтохинонов, выделенных из растения рода. Препарат проявляет антивирусные свойства по отношению к различным вирусам, в том числе гриппа и иммунодефицита человека ( М., .,К..,/, 1999,5,869,522). Недостатком данного препарата является высокая токсичность и относительно низкая противовирусная активность. Не обладает противогрибковой активностью Известно антивирусное средство растительного происхождения биологически активный полисахарид, выделенный из растения. Полисахарид, обладает антивирусной активностью в отношении вируса гриппа ( О.,.,..-,//, 1998, 5,711,948). Недостатком препарата является относительно низкая противовирусная активность,узкая избирательность действия по отношению к вирусным штаммам. Не обладает противогрибковой активностью Известен противогрибковый пентаеновый антибиотик флавофунгин,обладающий способностью подавлять возбудителей криптококкоза, хромомикоза и аспергиллеза, 1995, .95, .6, . 2023). Недостатком антибиотика флавофунгин является относительно высокая токсичность и низкая стабильность. Не обладает антивирусной активностью. Данный антибиотик является наиболее близким аналогом по отношению к заявляемому средству с антигрибковой и антивирусной активностью. Таким образом, известные противогрибковые и антивирусные средства обладают рядом недостатков- они являются недостаточно эффективными,токсичными, обладают избирательностью действия в отношении только определенных возбудителей,что снижает возможность их применения в медицинской и ветеринарной практике. Кроме того,не описаны препараты, обладающие одновременно противогрибковой и антивирусной активностью. Вместе с тем, наличие подобных препаратов позволило бы проводить комплексную терапию сочетанных заболеваний человека и животных, при которых наблюдается одновременное поражение грибковыми и вирусными инфекциями (в особенности у лиц с иммунодефицитными состояниями). Вследствие этого,имеется необходимость разработки более активных, менее токсичных препаратов, обладающих одновременно противогрибковой и противовирусной активностью и к которым не имеется устойчивости со стороны возбудителей грибковых и вирусных инфекций. Задачей изобретения является создание нового малотоксичного антигрибкового и антивирусного лечебного средства, эффективного в отношении различных штаммов - возбудителей дерматомикозов и глубоких микозов, а также обладающего противовирусной активностью. Данная цель достигается путем получения препарата очищенного полиенового антибиотика розеофунгин из продуцента. . Сущность изобретения заключается в получении из мицелия продуцента.ацетоново-бутанолыюго экстракта,содержащего полиеновый антибиотик розеофунгин,с последующим лиофильным высушиванием экстракта. Полученный препарат способен эффективно подавлять размножение возбудителей поверхностных и глубоких микозов различных штаммов грибов родов , и др., а также различных штаммов ортомиксовирусов, парамиксовирусов и герпесвирусов. Препарат представляет собой аморфный порошок лимонно-желтого цвета, флюоресцирует в ультрафиолете. Растворим в этаноле, ацетоне,диэтиловом эфире,бутаноле,бензоле,диметилформамиде, пиридине. Не растворим в воде, минеральных кислотах, хлороформе. Стабилен при хранении в закрытых сосудах и запаянных ампулах. Подлинность препарата подтверждается спектрофотометрически. Имеет специфическое оптическое поглощение при длине волны 263 нм(экстинкция 300) и 363(экстинкция 800-900). Сущность изобретения поясняется на следующих примерах. Пример 1. Стартовую культуру. выращивают на комплексной питательной среде следующего состава (г/л) кукурузный экстракт -10.0 крахмал - 15.0 глюкоза 10,0 СаСО 3 - 5.0 (4)204 - 3.5- 5.0. Через два дня культивации на стартовой среде для массовой продукции антибиотика продуцент выращивают на питательной среде следующего состава (г/л) рыбная мука - 10,0 пептон - 5,05.0 глюкоза - 20,0 лактоза - 20,0 СаСО 3 - 5.0(4)24 - 2.0 крахмал - 10,0. Собирают мицелий и проводят его взвешивание. Пример 2. Антибиотик получают из влажного мицелия путем экстракции ацетоном при нейтральном значении рН среды. Растворитель удаляют под вакуумом в роторном испарителе. Водный остаток повторно экстрагируют н-бутанолом. Бутанольный экстракт отделяют, промывают этанолом и дистиллированной водой. Бутанол удаляют под вакуумом при 40 и антибиотик преципитируют 510 объемами диэтилового эфира. Осадок отфильтровывают и лиофильно высушивают. Получают аморфный порошок лимонно-желтого цвета,который люминесцирует под ультрафиолетом. Выход антибиотика составляет до 5 г. на 1 л ферментационной среды. Пример 3. Противогрибковую активность антибиотика розеофунгина определяют путем выявления минимальных подавляющих доз препарата (мкг/мл),блокирующих рост тест-культур. Результаты определения активности антибиотика розеофунгин в отношении широкого спектра возбудителей грибковых инфекций представлены в таблице 1. Показана высокая противогрибковая активность антибиотика розеофунгин по отношению к возбудителям самых различных грибковых заболеваний (дерматомикозов, глубоких микозов,тропических микозов и т.д.). Пример 4. Противогрибковую активность антибиотика розеофунгин сопоставляют с противогрибковой активностью наиболее близких по структуре коммерческих антибиотиков флавофунгин,микотицин,сургумицин и флавомикоин. Определяют минимальную дозу препарата (мкг/мл),подавляющую рост дрожжей, дрожжеподобных грибов и мицелиальных грибов. Результаты сравнительного испытания противогрибковой активности антибиотика розеофунгин и коммерческих противогрибковых препаратов приведены в таблице 2. Показано более высокая противогрибковая активность антибиотика 3 розеофунгин в отношении испытанных культур по сравнению с другими противогрибковыми антибиотиками. Пример 5. Подавление размножения вирусов гриппа антибиотиком розеофунгин определяют при обработке вируссодержащего материала антибиотиком в дозах 10 мкг/мл и 50 мкг/мл с последующим титрованием вирусов на куриных эмбрионах. Для анализа используют штаммы вируса гриппа с различной антигенной структурой(71). Антивирусную активность определяют путем обработки вируссодержащего материала антибиотиком с последующим титрованием инфекционности обработанного материала на куриных эмбрионах. Вирусы выращивают в аллантоисной полости 9-ти дневных куриных эмбрионов в течение 36-48 часов при 37. О наличии вируса судят по реакции гемагглютинации с куриными эритроцитами. Вирусингибирующую активность оценивают по разности титров вируса (вЭИД 50) в обработанном и контрольном (без антибиотика) материалах. Разница в 1 логарифм и более свидетельствует о выраженной антивирусной активности препарата. Результаты определения вирусингибирующей активности антибиотика розеофунгин в отношении вируса гриппа приведены в таблице 3. Показана высокая вирусингибирующая активность розеофунгина в отношении вирусов гриппа с различной антигенной структурой. Пример 6. Подавление размножения парамиксовируса болезни Ньюкасла,штамм и парамиксовируса Сендай, штамм 960 антибиотиком розеофунгин определяют при обработке вируссодержащего материала антибиотиком в дозах 10 мкг/мл и 50 мкг/мл с последующим титрованием вирусов на куриных эмбрионах. Вирусы выращивают в аллантоисной полости 9-ти дневных куриных эмбрионов в течение 48-72 часов при 37. О наличии вируса в аллантоисной жидкости куриных эмбрионов судят по реакции гемагглютинации с куриными эритроцитами. Вирусингибирующую активность оценивают по разности титров вируса (вЭИД 50) в обработанном и контрольном (без антибиотика) материалах. Результаты определения вирусингибирующей активности антибиотика розеофунгин в отношении парамиксовирусов приведены в таблице 4. Показано, что антибиотик розеофунгин проявляет выраженную вирусингибирующую активность в отношении парамиксовируса Сендай и вируса болезни Ньюкасла. Пример 7. Способность антибиотика розеофунгин защищать от заражения вирусом гриппа определяют на модели однодневных цыплят. Определяют профилактическое действие антибиотика при приеме до заражения вирусом гриппа и терапевтическое действие антибиотика при приеме после заражения цыплят вирусом гриппа или одновременно с заражением. Оценивают эффективность защиты от летального заражения цыплят высокопатогенным вирусом гриппа птиц,штамм ///34 (71). Защиту от заражения выражают в процентах выживших цыплят от общего числа зараженных. Контролем служат зараженные цыплята, не получавшие антибиотик розеофунгин. Результаты опытов приведены в таблице 5. Показано, что наибольший лечебный эффект наблюдается при приеме розеофунгина в дозе 3 мкг/цыпленок. В этой дозе протективная активность розеофунгина составляла 86-89, независимо от способа применения препарата. Пример 8. Токсичность антибиотика розеофунгин определяют в опытах на животных. В острых опытах на белых мышах, морских свинках и кроликах антибиотик вводят перорально,внутрибрюшинно и внутривенно. Оценивают местные и системные токсические реакции, наличие гибели животных. При пероральном способе введения исследуемые дозы препарата составляют от 100,0 мг/кг до 2500,0 мг/кг. При внутрибрюшинном и внутривенном способах введения тестируемые дозы препарата составляют от 2,5 мг/кг до 50,0 мг/кг. Установлено, что максимально переносимая доза препарата при пероральном применении составляет 400,0 мг/кг,при внутрибрюшинном способе применения - 10,0 мг/кг и при внутривенном способе применения - 2,5 мг/кг. В хронических опытах изучают токсические реакции на морских свинках и кроликах при внутрибрюшинном и пероральном способах введения антибиотика розеофунгин. Токсичность розеофунгина при внутрибрюшинном введении определяют в дозах, соответствующих 1/2, 1/5 и 1/10 от максимально переносимой дозы. При пероральном введении дозы препарата составляют 50,0 и 100,0 мг/кг для морских свинок и 50,0 - 150,0 мг/кг - для кроликов. Дачу препарата осуществляют в течение 3, 14, 21 и 31 дней. В результате опытов не выявлено токсических реакций на антибиотик розеофунгин в указанных дозах. Исследовано местное раздражающее действие антибиотика розеофунгин в концентрации 1 и 5 при ежедневных аппликациях на неповрежденную кожу, а также при нанесении на конъюнктиву глаза кроликов. Показано отсутствие раздражающего действие антибиотика в указанных дозах. Из приведенных данных следует, что антибиотик розеофунгин не обладает токсичностью в дозах,значительно превышающих эффективные дозы,необходимые для проявления противогрибковой и антивирусной активности. Таким образом, антибиотик розеофунгин,полученный из экстракта мицелияо .обладает выраженной противогрибковой активностью в отношении широкого спектра возбудителей грибковых инфекций,имеет высокую антивирусную активность по отношению к разным вирусам и не 4 обладает токсичностью в дозах, значительно токсичности и отсутствии резистентности к новому превышающих эффективные дозы препарата. лечебному средству. Предлагаемое лечебное Преимущество изобретения заключается в средство с противогрибковой и антивирусной сочетании у предлагаемого лекарственного средства активностью позволяет расширить арсенал высокой противогрибковой и антивирусной лечебных противогрибковых и антивирусных активности, значительной эффективности действия препаратов. против широкого круга возбудителей, низкой Спектр противогрибковой активности антибиотика розеофунгин. Таблица 1 Тест-организм Минимальная подавляющая концентрация, мкг/мл 0.53.4.60 Сопоставление противогрибковой активности антибиотика розеофунгин с противогрибковой активностью других полиеновых антибиотиков. Таблица 2 Антибиотики Минимальная подавляющая концентрация в мкг/мл Дрожжи и дрожжеподобные грибы Мицелиальные грибы Розеофунгин 2,0-3,1 1,5-6,2 Флавофунгин 6,0-100,0 8,0-100,0 Микотицин 6,0-10,0 5,0-10,0 Сургумицин 3,0-30,0 3,0-30,0 Флавомикоин 31,0-62,0 4,0-16,0 5 Вирусингибирующая активность антибиотика розеофунгин в отношении вирусов гриппа. Таблица 3 ВИРУС Обратные логарифмы ЭИД 50 Доза 10 мкг Доза 50 мкг 4,2 4,5 4,5 1,5 Вирусингибирующая активность антибиотика розеофунгин в отношении парамиксовирусов Таблица 4 ВИРУС Доза 10 мкг Сендай (штамм 960) ВБН (штамм) Обратные логарифмы ЭИД 50 Доза 50 мкг 6,0 9,2 4,6 8,8 Определение терапевтической и профилактической активности антибиотика розеофунгин в отношении вируса гриппа в опытах на цыплятах. Таблица 5 Доза препарата Способ применения препарата Профилактический, до Лечебный, после заражения вирусом заражения вирусом 50 мкг/цыпленок 72 75 12 мкг/цыпленок 72 75 3 мкг/цыпл 86 86 Контроль 0 0 Примечание - Индекс защиты, . ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Лечебное средство с противогрибковой и антивирусной активностью,обладающее способностью подавлять размножение возбудителей грибковых инфекций человека и животных и размножение различных вирусов, отличающееся тем, что в качестве лечебного средства используют лиофильно высушенный ацетоново-бутанольный экстракт мицелия продуцента

МПК / Метки

МПК: A61K 35/74, A61K 36/06, A61P 31/10, A61P 31/12, C12R 1/465

Метки: противогрибковой, средство, антивирусной, лечебное, активностью

Код ссылки

<a href="http://kzpatents.com/6-ip25633-lechebnoe-sredstvo-s-protivogribkovojj-i-antivirusnojj-aktivnostyu.html" rel="bookmark" title="База патентов Казахстана">Лечебное средство с противогрибковой и антивирусной активностью</a>

Похожие патенты