Скачать PDF файл.

Формула / Реферат

(57) Использование: медицина, в частности, вирусология, а именно разработка новых противовирусных препаратов
Цель: применение в медицинской и ветеринарной практике антивирусного средства на основе смеси лиофильио высушенных экстрактов растений Chamerion angustifolium и Camellia sinensis в соотношении 1:1 для подавления размножения вирусов гриппа различных штаммов.
Сущность изобретения заключается в получении композитного антивирусного средства путем извлечения спиртовых экстрактов из растений Chamerion angustifolium и Camellia sinensis, содержащих дубильные вещества гидролизуемого и конденсированного типов, в количестве не менее 6% от сухой массы экстракта и флавоноидов в количестве не менее 1,5% от сухой массы экстракта, их лиофилыюм высушивании и смешивании в соотношении 1:1.
Преимущество предлагаемого изобретения заключается в большей эффективности антивирусного действия против различных штаммов вируса гриппа по сравнению с имеющимися коммерческими антивирусными препаратами, отсутствии токсичности в вирусингибирующих дозах, отсутствии резистентности у вирусов гриппа к новому антивирусному средству, доступности сырья для получения препарата. Предлагаемое антивирусное средство, позволяет расширить арсенал противогриппозных препаратов и может быть использовано в качестве импортозамещающего противовирусного препарата.

Текст

Смотреть все

(51) 61 36/00 (2006.01) 61 36/82 (2006.01) 61 31/12 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ИННОВАЦИОННОМУ ПАТЕНТУ Сущность изобретения заключается в получении композитного антивирусного средства путем извлечения спиртовых экстрактов из растений(Иван-чай узколистный) и(Камелия китайская), содержащих дубильные вещества гидролизуемого и конденсированного типов, в количестве не менее 6 от сухой массы экстракта и флавоноидов в количестве не менее 1,5 от сухой массы экстракта,их лиофильном высушивании и смешивании в соотношении 11. Преимущество предлагаемого изобретения заключается в большей эффективности антивирусного действия против различных штаммов вируса гриппа по сравнению с имеющимися коммерческими антивирусными препаратами,отсутствии токсичности в вирусингибирующих дозах,отсутствии резистентности у вирусов гриппа к новому антивирусному средству, доступности сырья для получения препарата. Предлагаемое антивирусное средство,позволяет расширить арсенал противогриппозных препаратов и может быть использовано в качестве импортозамещающего противовирусного препарата.(72) Турмагамбетова Айжан Сабиржановна Богоявленский Андрей Павлинович Березин Владимир Элеазарович Зайцева Ирина Алексеевна Соколова Надежда Сергеевна Алексюк Мадина Сапарбаевна Алексюк Павел Геннадьевич(73) Республиканское государственное предприятие на праве хозяйственного ведения Институт микробиологии и вирусологии Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан(56) Предварительный патент РК 9514,16.10.2000(54) КОМПОЗИТНОЕ АНТИВИРУСНОЕ СРЕДСТВО РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ ФЛАВОВИР(57) Использование медицина, в частности,вирусология,а именно разработка новых противовирусных препаратов Цель применение в медицинской и ветеринарной практике антивирусного средства на основе смеси лиофильно высушенных экстрактов растений(Иван-чай узколистный) и(Камелия китайская) в соотношении 11 для подавления размножения вирусов гриппа различных штаммов. Изобретение относится к области медицины, в частности вирусологии, а именно разработке новых противовирусных препаратов. Инфекционные заболевания входят в тройку основных причин гибели людей и животных. Доля вирусных заболеваний в структуре инфекционной патологии в Республике Казахстан составляет более 90, а суммарный экономический ущерб от гриппа и ОРЗ достигает не менее 85,5 от общих потерь вследствие инфекционных заболеваний. В результате точечных мутаций в поверхностных гликопротеинах вируса гриппа А (гемагглютинине(НА) и нейраминидазе ( каждые 2-3 года возникают новые эпидемичные штаммы. Вирус гриппа способен обходить защитные механизмы иммунитета человека используя разнообразие и изменчивость антигенной структуры вирионов, и поэтому длительного иммунитета против вируса нет ни после естественной инфекции, ни после вакцинации. До настоящего времени не существует достаточно эффективных средств предотвращения распространения данной инфекции. В качестве лечебных средств против вируса гриппа используются синтетические химиопрепараты и вещества растительного происхождения. Известный российский противовирусный препарат Арбидол(умифеновир) в чрезвычайно высоких концентрациях может ингибировать поверхностный вирусный белок гемагглютинин и подавлять слияние вирусной липидной оболочки с внутриклеточными мембранами, предотвращая проникновение вируса внутрь клетки. (В.И. Петров,И.А. Ленева,С.В. Недогода Применение отечественного противовирусного препарата с позиций доказательной медицины//Журнал Лечащий врач 2011. - 01). При этом, появление штаммов, устойчивых к умифеновиру, было значительно ниже по сравнению с препаратами ремантадин и амантадин. ( .,, ,.. 81 (2) 132-140). Занамивир и осельтамивир были разработаны для подавления функции нейраминидазы вируса гриппа. Известно, что оба препарата эффективны в отношении всех 16 серотипов вируса гриппа А и всех серотипов вируса гриппа В (Патент 5763483, фирмапо лицензии, .,353, ,94404). Однако, для лечения вирусной инфекции рекомендовано внутривенное применение занамивира, что не подходит для его широкого применения. В то же время, в профилактических целях занамивир можно применять перорально, но, согласно последним данным,при пероральном применении наблюдаются тяжелые побочные эффекты, такие как рвота и головокружение ( Р., . большого количества устойчивых к нему штаммов вируса гриппа, вследствие чего применение данных препаратов стало малоэффективным. Известен ингибитор гемагглютинирующей активности - аналог изоникотиновой кислоты амизон, обладающий активностью против вируса гриппа (Патент 6752). Однако, данный препарат,имеет относительно низкую антивирусную активность в отношении ряда штаммов вируса гриппа. Известен этанольный экстракт, полученный из равных частей растений жгун-корень,(Сапожниковия растопыренная), дудника,пиона, форсиции, травы мяты,(Ширококолокольчик крупноцветковый), корня шлемника,(Атрактилодес макроцефала),(Гардения жасминовидная), корня схизонепеты и имбиря,(Солодка уральская),(Лоницера флес),(Горянка корейская) и(Соссюрея) (Патент 20120276223 А 1). Недостатком данного препарата является его применение в достаточно высоких дозах,что способствует большему риску возникновения аллергических реакций. Известен этанольный экстракт, содержащий флавоноиды, из растения(Солодка уральская),который способен активировать иммунный ответ и подавлять репродукцию вирусов (Патент , заявка 99108701/14, Шульц Э.Э., Толстиков Г.А.,Петрова Т.Н., Толстикова Т.Г., Покровский А.Г.,Ильичева Т.Н., Проняева Т.Р.). Недостатками данного препарата является относительно низкая иммуностимулирующая и антивирусная активность. Известно антивирусное средство растительного происхождения биологически активный флавоноидный агликон, выделенный из растения(Солянка холмовая). Флавоноидный агликон обладает антивирусной активностью в отношении вируса гриппа (Адекенов С.М.,Кульмагамбетова Э.А., Прибыткова Л.Н. Патент РК 9514). Вместе с тем, эффективность данного препарата является относительно невысокой,вирусингибирующее действие проявляется не ко всем исследованным штаммам вируса гриппа. Последний препарат растительного происхождения является наиболее близким аналогом по отношению к заявляемому антивирусному средству. Таким образом, известные антивирусные средства обладают рядом недостатков - они являются недостаточно эффективными, требуют использования дополнительных препаратов для снятия иммунодепрессивного состояния, что ограничивает возможность их применения в медицинской практике. Вследствие этого, поиск новых активных, малотоксичных и эффективных в отношении гриппа препаратов, является одной из приоритетных задач здравоохранения. Целью изобретения является создание нового малотоксичного композитного антивирусного средства растительного происхождения,эффективного в отношении различных штаммов вируса гриппа. Данная цель достигается путем приготовления композитного растительного препарата в виде смеси лиофильно высушенных экстрактов, полученных из растений(Иван-чай узколистный) и(Камелия китайская). Сущность изобретения заключается в получении спиртовых экстрактов из растений(Иван-чай узколистный) и(Камелия китайская), их лиофильном высушивании и смешивании в соотношении 11. Полученный растительный препарат способен эффективно подавлять размножение различных штаммов вируса гриппа. Сущность изобретения поясняется на следующих примерах. Пример 1 Для получения композитного препарата из растений(Иван-чай узколистный) и(Камелия китайская), траву(Иван-чай узколистный) и листья(Камелия китайская) отдельно размалывали на дробилке до размеров частиц 3-5 мм. Содержание пыли не превышало 20. Измельченное сырье подвергали водноспиртовой экстракции путем обработки 70 водным этанолом при температуре кипения растворителя. Полученные экстракты упаривали на ротационном пленочном испарителе при температуре 60 С и остаточном давлении 0,2-0,4 кгс/см 2. Упаренные экстракты высушивали в вакуумвыпарном аппарате при постоянном перемешивании при температуре 50-60 С и разряжении 0,6-0,7 кгс/см 2. Полученные высушенные экстракты смешивали в соотношении 11. Препарат представляет собой смесь экстрактов растений(Иван-чай узколистный) и(Камелия китайская) в соотношении 11. Пример 2 Для качественного и количественного контроля подлинности и стандартизации экстрактов(Иван-чай узколистный) и(Камелия китайская) используют стандартные методы по определению содержания основных компонентов - дубильных веществ гидролизуемого и конденсированного типа и флавоноидов для(Иван-чай узколистный) и(Камелия китайская). Определение дубильных веществ гидролизуемого и конденсированного типа 1,0 г (точная навеска) препарата, помещают в колбу вместимостью 100 мл и экстрагируют 50 мл спирта этилового 50,при интенсивном встряхивании в течение 15 минут. Экстракт фильтруют через ватный тампон в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора спиртом этиловым 50 до метки и перемешивают. 5 мл полученного раствора помещают в пробирку для центрифугирования, прибавляют 5 мл реактива осаждения. Через 30 мин смесь центрифугируют при скорости 3000 об/мин в течение 30 мин. Надосадочную жидкость сливают, к осадку в пробирке прибавляют 10 мл 0,025 раствора аммиака, содержимое перемешивают стеклянной палочкой, которую промывают 5 мл 0,025 раствора аммиака, прибавляя его к основному объему, и центрифугируют в тех же условиях. После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, осадок в пробирке растворяют в 3 мл 30 раствора кислоты уксусной,количественно переносят в колбу вместимостью 250 мл с помощью 80-100 мл воды очищенной,нейтрализуют 25 мл 5 раствора натрия гидрокарбоната, прибавляют 0,5 мл индикатора ксиленолового оранжевого и титруют 0,01 М раствором динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) до желтого окрашивания. Содержание дубильных веществв препарате,в пересчете на танин, в процентах, вычисляют по формуле где 0,0013 - количество танина, соответствующее 1 мл 0,01 М раствора динатриевой соли ЭДТА, в граммах К - поправочный коэффициент к молярности 0,01 М раствора динатриевой соли ЭДТА- объем раствора динатриевой соли ЭДТА,израсходованного на титрование, в миллилитрах- масса навески препарата, в граммах. Примечание. Приготовление реактива осаждения 1 г цинка оксида помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и растворяют в смеси 10 мл 25 водного аммиака и 2,5 г аммония хлорида, доводят объем раствора водой очищенной до метки. Содержание дубильных веществ гидролизуемого и конденсированного типа в экстракте растения должно быть не менее 6 от сухой массы. Определение флавоноидов (катехинов) Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Около 1 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 150 мл, прибавляют 30 мл 50 спирта. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин, периодически встряхивая для смывания частиц сырья со стенок. Горячее извлечение фильтруют через вату в мерную колбу вместимостью 100 мл так, чтобы частицы сырья не попадали на фильтр. Вату помещают в колбу для экстрагирования и прибавляют 30 мл 50 спирта. Экстракцию повторяют еще дважды в описанных выше условиях, фильтруя извлечение в ту же 3 мерную колбу. После охлаждения объем извлечения доводят 50 спиртом до метки и перемешивают(раствор А). В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1 мл раствора алюминия хлорида в 95 спирте и доводят объем раствора 95 спиртом до метки. Через 40 мин измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 415 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 1 мл извлечения, 1 капли разведенной уксусной кислоты и доведенный 95 спиртом до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл. Параллельно измеряют оптическую плотность раствора Государственного стандартного образца (ГСО) рутина, приготовленного аналогично испытуемому раствору. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье в процентахвычисляют по формуле где- оптическая плотность испытуемого раствора- оптическая плотность раствора ГСО рутина- масса сырья в граммах 0 - масса ГСО рутина в граммах- потеря в массе при высушивании сырья в процентах. Примечание. Приготовление раствора Государственного стандартного образца (ГСО) рутина около 0,05 г (точная навеска) ГСО рутина,предварительно высушенного при температуре 130135 градусов Цельсия в течение 3 ч, растворяют в 85 мл 95 спирта в мерной колбе вместимостью 100 мл при нагревании на водяной бане, охлаждают,количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают. Содержание флавоноидов в экстракте растения в пересчете на рутин должно быть не менее 1,5 от сухой массы. Пример 3 Для изучения токсичности композитного антивирусного средства, содержащего смесь экстрактов растений(Иванчай узколистный) и(Камелия китайская) в соотношении 11, испытание проводили на двух видах животных белых мышах обоего пола, массой 18-20 г, и крысах обоего пола,массой 250-350 г. В исследованиях использовали здоровых животных, содержащиеся в соответствии с действующими правилами, на которых ранее не проводили какие-либо испытания. Массу животных определяли в день начала испытания. Испытание на белых мышах. Препарат вводили внутрибрюшинно 5-ти животным в дозе, равной 50,0 мг на кг веса и 100,0 мг на кг веса. Сухой препарат растворяли соответствующим растворителем(стерильный физиологический раствор) в объеме не более 0,5 мл. Испытание на крысах. Препарат вводили подкожно 2 животным в дозе 50,0 мг на кг веса и 4 100,0 мг на кг веса. Сухой препарат растворяли соответствующим растворителем(стерильный физиологический раствор) в объеме не более 0,5 мл. Препараты вводили стерильным шприцем,погрешность измерения которого не должна превышать 4. Наблюдение за животными осуществляли ежедневно в течение 7 суток. Экспериментально установлено (табл. 1), что в дозе до 100 мг на кг веса композитное антивирусное средство, выделенное из экстрактов растений(Иван-чай узколистный) и(Камелия китайская) в соотношении 11 не обладает токсическими свойствами. Пример 4 Изучение вирусингибирующей активности композитного антивирусного средства на основе смеси экстрактов растений(Камелия китайская) в соотношении 11 проводили на модели вируса гриппа А,штамм//тк/1/34 (71). Вирус выращивали в аллантоисной полости 9-10 дневных куриных эмбрионов в течение 24 часов при 37 градусах Цельсия. Гемагглютинирующую активность вирусов определяли по стандартной методике с использованием 1-ной взвеси куриных эритроцитов. Подавление репродукции вируса определяли при одновременном инокулировании в куриные эмбрионы исследуемого композитного антивирусного средства в разных дозах и вируса в количестве 100 ЭИД 50 с последующим определением титра гемагглютинации. Антивирусную активность испытуемого препарата сравнивали с антивирусной активностью коммерческих противовирусных препаратов ремантадин, тамифлю и амизон. Статистическую обработку материала осуществляли с помощью критерия Стьюдента. Экспериментально установлено (табл. 2), что в дозе 0,8 мг на кг веса композитное антивирусное средство на основе смеси экстрактов растений(Иван-чай узколистный) и(Камелия китайская) в соотношении 11 подавляет репродукцию исследуемого вируса на 83,7. Вирусингибирующая активность композитного антивирусного средства на основе смеси экстрактов растений(Иван-чай узколистный) и(Камелия китайская) в соотношении 11 превышала вирусингибирующую активность коммерческих препаратов ремантадин и амизон, и была сопоставима с вирусингибирующей активностью коммерческого препарата тамифлю. Пример 5 Изучение вирусингибирующей активности композитного антивирусного средства на основе смеси экстрактов растений на модели вируса гриппа А, штамм А/Алматы/8/98(32). Вирус выращивали в аллантоисной полости 9-10 дневных куриных эмбрионов в течение 36 часов при 37 градусах Цельсия. Гемагглютинирующую активность вирусов определяли по стандартной методике с использованием 1-ной взвеси куриных эритроцитов. Подавление репродукции вируса определяли при одновременном инокулировании в куриные эмбрионы исследуемого препарата в разных дозах и вируса в количестве 100 ЭИД 50 с последующим определением титра гемагглютинации. Антивирусную активность испытуемого препарата сравнивали с антивирусной активностью коммерческих противовирусных препаратов ремантадин, тамифлю и амизон. Статистическую обработку материала осуществляли с помощью критерия Стьюдента. Экспериментально установлено (табл. 3), что в интервале доз 0,032-4,0 мг на кг веса антивирусное средство на основе смеси экстрактов растений(Иван-чай узколистный) и(Камелия китайская) в соотношении 11 полностью подавляло репродукцию исследуемого вируса. Показано, что разработанное средство превышает вирусингибирующую активность всех взятых для исследования коммерческих препаратов - амизон,тамифлю и ремантадин. Пример 6 Изучение вирусингибирующей активности композитного антивирусного средства на основе смеси экстрактов растений(Камелия китайская) в соотношении 11 проводили на модели вируса гриппа А,штамм А/крачка/Южная Африка/1/61 (53). Вирус выращивали в аллантоисной полости 9-10 дневных куриных эмбрионов в течение 36 часов при 37 градусах Цельсия. Гемагглютинирующую активность вирусов определяли по стандартной методике с использованием 1-ной взвеси куриных эритроцитов. Подавление репродукции вируса определяли при одновременном инокулировании в куриные эмбрионы исследуемого препарата в разных дозах и вируса в количестве 100 ЭИД 50 с последующим определением титра гемагглютинации. Антивирусную активность испытуемого препарата сравнивали с антивирусной активностью коммерческих противовирусных препаратов ремантадин, тамифлю и амизон. Статистическую обработку материала осуществляли с помощью критерия Стьюдента. Экспериментально установлено (табл. 4), что в дозе 0,8 и 4,0 мг на кг веса композитное антивирусное средство на основе смеси экстрактов растений(Иван-чай узколистный) и(Камелия китайская) в соотношении 11 полностью подавляло репродукцию исследуемого вируса. Вирусингибирующая активность разработанного средства,превышала вирусингибирующую активность коммерческих препаратов амизон и тамифлю, и в дозе 4,0 мг на кг веса была сопоставима с вирусингибирующей активностью коммерческого препарата ремантадин. Преимущество предлагаемого изобретения заключается в большей эффективности антивирусного действия разработанного средства на основе смеси экстрактов растений(Иван-чай узколистный) и(Камелия китайская) в соотношении 11 против различных штаммов вируса гриппа по сравнению с имеющимися коммерческими антивирусными препаратами,отсутствии токсичности в вирусингибирующих дозах,отсутствии резистентности у вирусов гриппа к новому антивирусному средству, доступности сырья для получения препарата. Предлагаемое антивирусное средство позволяет расширить арсенал противогриппозных препаратов. Таблица 1 Изучение токсичности антивирусного средства на основе смеси экстрактов растений(Иван-чай узколистный) и(Камелия китайская) Токсичность на крысах (подкожное введение) 50 100 0/2 0/2 0/2 0/2 Гибель животных Некроз или абсцесс Контроль - стерильный фосфатный 0/5 0/2 буфер ( 7,2) ПримечаниеВ числителе дано количество погибших животных или имеющих некроз, в знаменателе - количество животных, получивших препарат. Летальность учитывалась в течение 7 суток после введения препаратов.Доза препарата в мг/кг животное Таблица 2 Подавление репродукции вируса гриппа штамм //тк/1/34 (71) под действием композитного антивирусного средства на основе смеси экстрактов растений(Иван-чай узколистный) и(Камелия китайская) Количество препарата (мг на кг Ремантадин веса) 0,032 0,16 0,8 4,0 Подавление репродукции вирусаКомпозитное антивирусное средство на основе смеси экстрактов растений . Тамифлю Амизон(Иван-чай узколистный) и С.(Камелия китайская) 0,00,0 0,00,0 0,00,0 0,00,0 0,00,0 22,50,03 26,80,04 0,00,0 83,70,05 80,00,05 2,00,05 83,70,05 Таблица 3 Подавление репродукции вируса гриппа штамм А/Алматы/8/98 (32) под действием композитного антивирусного средства на основе смеси экстрактов растений(Иван-чай узколистный) и(Камелия китайская) Подавление репродукции вирусаКомпозитное антивирусное средство на основе смеси экстрактов растений . Тамифлю Амизон(Иван-чай узколистный) и С.(Камелия китайская) 0,00,0 0,00,0 99,80,01 0,00,0 0,00,0 100,00,0 46,30,05 0,00,0 100,00,0 68,80,05 5,40,02 100,00,0 Таблица 4 Подавление репродукции вируса гриппа штамм А/крачка/Южная Африка/1/61 (53) под действием композитного антивирусного средства на основе смеси экстрактов растений(Иванчай узколистный) и(Камелия китайская) Подавление репродукции вирусаКомпозитное антивирусное средство на основе смеси экстрактов растений . Тамифлю Амизон(Иван-чай узколистный) и С.(Камелия китайская) 0,00,0 0,00,0 53,7 0,04 0,00,0 0,00,0 85,4 0,03 20,10,03 0,00,0 100,0 0,0 40,40,03 2,40,05 100,00,0 ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Композитное антивирусное средство растительного происхождения,обладающее вирусингибирующей активностью в отношении различных штаммов вируса гриппа, отличающееся тем, что в качестве антивирусного средства используют смесь лиофильно высушенных экстрактов растений(Иванчай узколистный) и(Камелия китайская) в соотношении 11, содержащая дубильные вещества гидролизуемого и конденсированного типов в количестве не менее 6 от сухой массы экстракта и флавоноиды в количестве не менее 1,5 от сухой массы экстракта.

МПК / Метки

МПК: A61P 31/12, A61K 36/82, A61K 36/00

Метки: антивирусное, средство, композитное, флавовир, растительного, происхождения

Код ссылки

<a href="http://kzpatents.com/6-ip30638-kompozitnoe-antivirusnoe-sredstvo-rastitelnogo-proishozhdeniya-flavovir.html" rel="bookmark" title="База патентов Казахстана">Композитное антивирусное средство растительного происхождения &#8220;флавовир&#8221;</a>

Похожие патенты