Полимерный конъюгат, фармацевтическая композиция

(08 220/36, 22056, 22060) НАЦИОНАЛЬНОЕ ПАТЕНТНОЕ ВЕДОМСТВО РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(56)9314142 , 22.07.19939313804 ,22.07.19934943579 , 24.04.1990 Физиологически и оптически активные полимерные вещества,Рига Зинатне, 1971,с. 3-9 в которой группаявляется пространственной группой, имеющей соответствующие концевые амино- и карбонильные группы, которые разделены, по крайней мере, тремя атомами, и О-СРТ представляет остаток камптотецина, при этом С-20-гидроксигруппа камптотецина связана с концевой карбонильной группой пространственной группыи в которойпредставляет гидрокси- или остаток формулы 23, а также к фармацевтической композиции, содержащей указанный полимерный конъюгат и обладающей противоопухолевой активностью. 9773 Настоящее изобретение относится к водорастворимому полимерносвязанному камптотецину и производным полимерносвязанного камптотецина, наделенным противоопухолевой активностью, к способу их получения и к содержащим их лекарственным препаратам. Камптотецин представляет алкалоид, выделенный из листьев и корыизвестны также другие аналоги камптотецина, которые получены полусинтезом или полным синтезом из камптотецина смотри . . 94(10),3631, 1972, (7), 404, (1970) патент США 4981969 (. 1, 1991), патент США 5049668 (. 17, 1991). Камптотецин имеет пентациклическую структуру, состоящую из системы конденсированных колец,образующей хинолиновое кольцо (кольца А и В),пирролидиновое кольцо (кольцо С), пиридиновое кольцо (кольцо ) и -гидроксилактоновую составляющую (кольцо Е). Камптотецин и несколько его производных, замещенных в кольце А, проявляют антиопухолевую активность против множества плотных опухолевых линий, включая клеточные линии, невосприимчивые к химиотерапевтическим средствам (смотри. 28, 192 (1991. Камптотецин, а также большинство его производных практически нерастворимы в наполнителях,подходящих для парентерального введения, из-за слабой основности атома азота хинона. Предлагалось несколько водорастворимых пролекарств для того, чтобы солюбилизировать камптотецин, например, производные 20-0-фосфата или 20-0-ациламино, которые можно протонировать посредством минеральных кислот, обеспечивая таким образом растворимость в воде смотри патент США 4943579 (. 24, (1990). Введение таких лекарственных средств связано с побочным токсическим действием, включая гематологическое и желудочно-кишечное. Были предприняты многочисленные попытки для улучшения терапевтического индекса камптотецина путем модификации его структуры. Настоящее изобретение обеспечивает полимерные конъюгаты камптотецина, которые являются водорастворимыми и обладают противоопухолевой активностьюи пониженной токсичностью. Более конкретно, изобретение обеспечивает полимерный конъюгат, который обозначен здесь как А, и который состоит, по существу, из в которойпредставляет пространственную группу, имеющую соответствующие концевые амино и карбонильные группы, которые разделены, по крайней мере, тремя атомами, и О-СРТ представляет остаток камптотецина, при этом С-20 группа камптотецина связана с концевой карбонильной группой пространственной группыи, в которойпредставляет гидрокси или остаток формулы -Н-СН 2-СН(ОН)-СН 3. Изобретение также обеспечивает способ получения полимерного конъюгата, который определен выше, при этом способ включает взаимодействие производной 20-0 ациламино-камптотецина формулы 7 Н,(7) в которойи О-СРТ являются такими, как они определены выше, с полимером, состоящим, по существу, из в которой 2 представляет (а) остаток активного сложного эфира или (в) гидрокси и возможное замещение остаточных групп активного сложного эфира 1-амино-2-пропанолом. Полимерный конъюгат А содержит -(2 гидроксипропил)метакрилоиламидные звенья, представленные формулой 1, в количестве 60 мол. или выше, например, по крайней мере, 80 мол. или, по крайней мере, 85 мол Эти звенья могут присутствовать в количестве от 91 до 98 мол Конъюгат может содержать от 1 до 40 мол. 20-0-(-метакрилоилглициламиноацил)камптотециновых звень 9773 ев, представленных формулой 2, например, от 1 до 20 мол. этих звеньев. Конъюгат может содержать от 1 до 8 мол., например, от 2 до 6 мол. этих звеньев. Пространственная группаможет иметь от трех до двенадцати, например, от шести до девяти атомов. Обычно группа является чувствительной к внутриклеточному гидролизу. Предпочтительно она является устойчивой к внеклеточному гидролизу. Пространственная группа может быть пептидной промежуточной группой, содержащей, например, от 1 до 4 или от 2 до 4 аминокислотных остатков. Промежуточная группа может, таким образом, быть дипептидом, трипептидом или тетрапептидом. Предпочтительно, пространственную группувыбирают из -, -, -, -,-, -, -, -, ,, , , ,, и . Альтернативно,пространственная группапредставляет группу формулы Н, в которойпредставляет С 3-С 6 линейный или разветвленный алкил, например,-(СН 2)-, в которомравно 3, 4, 5 или 6. Альтернативно пространственная группаявляется группой формулы , , , , , , , , , , , , , или , гдеимеет те же самые значения, которые указаны выше. Остаток камптотецина обозначен О-СРТ. Камптотецин может быть самим камптотецином или его аналогом, например, А-кольцевым аналогом. Такой А-кольцевой аналог представляет, таким образом,камптотецин,замещенный в А-кольце. Камптотецин может быть в природной -форме или в -форме или в смеси - и -формы (рацемическая смесь). Соответствующие остатки камптотецина О-СРТ обозначены формулой 5 в которой 1 представляет, например, водород, гидрокси-, или амино-, или метилендиоксигруппу, связанную с двумя смежными атомами углеродов в Акольце. Предпочтительно, 1 представляет водород,9-, 10-, 11- или 12-гидрокси-, 9- или 10-нитро-, 9 или 10-амино- или 10-, 11-метилендиокси. Более предпочтительными являются остатки камптотецина формулы 6 в которой 1 является таким, как он определен выше. Предпочтительно звенья формулы 2 присутствуют в количестве от 1 до 10 мол., например, от 0,5 до 5 мол Также предпочтительно, чтобы содержание комптотецина составляло от 1 до 10(вес/вес), более предпочтительно от 4 до 8(вес/вес) относительно полимерного компонента конъюгата. Изобретение также обеспечивает производную 20-0-ациоаминокамптотецина формулы 7, которая определена выше. Настоящее изобретение, кроме того, обеспечивает способ получения производной 20-0-ациоаминокамптотецина, который включает конденсацию камптотецина с -замещенной аминоацильной производной формулы 8(8) 3,в которойявляется такой, как она определена выше, и 3 представляет защитную группу для амино, например, -, , , трифенилсилил,дифенилметилен, или трифенилметил, и Р является остатком активного сложного эфира, например, рнитрофенокси, пентафторфенокси или -гидроксисукцинимидо, в присутствии активирующего агента,например, 4-диметиламинопиридина, для получения(9) 3(-),в которой 3,и (ОРТ) являются такими, как они определены выше, и удаление -защитной группы из полученного соединения. Получение соединений формулы 8 осуществляют в соответствии со стандартными методиками синтеза, которые хорошо известны из литературы. Подходящие -защищенные аминоацильные производные формулы 8 включают -тритилфенил-аланил-лейцил-глицил-р-нитрофениловый эфир (8 а) илитритил-глициллейцил-глицил-р-нитрофениловый эфир (8 в) или 6 тритилгексаноил-р-нитрофениловый эфир (8 с). Некоторые производные формулы 8 и их получение описаны также в нашей находящейся на совместном рассмотрении Международной заявке на патент РСТ/ЕР 94/01100. Таким образом, можно допустить, например,взаимодействие камптотецина с молярным избытком. Например, с 5-кратным молярным избытком или большим, главным образом 2 мол. эквивалентом, -замещенного аминоацильного производного формулы 5 в безводном растворителе, например,безводном диметилформамиде или диметилсульфоксиде, в присутствии активирующего агента, например, 4-диметиламинопиридина. В этом способе замещенную аминокислоту вводят в положение С-20 3 9773 молекулы камптотецина. Реакцию можно обычно осуществить в течение времени от 8 до 24 часов. Реакцию обычно проводят при температуре от 15 до 40 С. Следует отметить, что, следуя таким реакционным условиям, 9-аминокамптотецин пространственно специфически взаимодействует в С-20 гидроксиположении, что обусловлено слабой основностью 9-аминогруппы. Защитную группу 3 для амино удаляют посредством соответствующего средства, устраняющего защиту, при этом получают производное 20-0 ациламино-камптотецина формулы 7. Следовательно, устранение защиты может быть достигнуто путем обработки уксусной кислотой, или путем восстановления. Следовательно, может быть также использован гидрогенолиз. Конденсацию производного 20-0-ациламинокамптотецина формулы 7 с полимером, состоящим,по существу, из -(2-гидроксипропил)метакрилоиламидных звеньев формулы 1 в количестве от 60 до 99 мол. и -метакрилоиламидных звеньев формулы 4 в количестве от 1 до 40 мол. и, возможно, последующее замещение остаточных групп активного эфира осуществляют в условиях, способных сохранить природу связи между камптотецином и промежуточными группами (А), а также свойства конъюгата. Полимеры, состоящие, по существу, из -(2 гидроксипропил)-метакрилоиламидных звеньев формулы 1 в количестве от 60 до 99 мол. и метакрилоилглициновых звеньев формулы 4 в количестве от 1 до 40 мол., получают путем сополимеризации -(2-гидроксипропил)метакриламида с метакрилоилглицином или с производными активного -метакрилоилглицинового эфира, которые описаны в Ма. . 178, 2159 (1977). 2 может представлять фенилоксигруппу, которая замещена в фенильном кольце одной или несколькими группами, оттягивающими электроны. Примеры подходящих групп, оттягивающих электроны, включают нитро-(-2) и галоген. 2 является предпочтительно отщепляемой группой, в которойявляется группой, оттягивающей электроны например, -2 или галогеном, например,фтором или хлором, иявляется целым числом от 1 до 5, типично от 1 до 3, предпочтительно 1 или 2. Предпочтительно 2 является р-нитрофеноксигруппой или 2,4-дихлорфеноксигруппой. Предпочтительно реакцию между полимером, в котором 2 представляет (а) остаток активного эфира, и соединением формулы 7 для получения полимерного конъюгата изобретения осуществляют в безводном полярном органическом растворителе,например, диметилформамиде или диметилсульфоксиде. Реакцию можно обычно осуществлять в тече 4 ние времени от 8 до 24 часов. Реакцию проводят при температуре от 15 до 30 С, предпочтительно при комнатной температуре в течение 15-ти часов затем можно осуществить аминолиз остаточного активного эфира в присутствии 1-амино-2-пропанола при комнатной температуре в течение времени от 0,5 до 1 часа. Этот конъюгат соответственно осаждают ацетоном, растворенным в этаноле, и переосаждают ацетоном. В другом методе, для того чтобы получить полимерный конъюгат изобретения, реакцию между полимером, в котором 2 представляет гидроксигруппу(в), и соединением формулы 7 осуществляют в безводном полярном растворителе, например, диметилформамиде или диметилсульфоксиде в присутствии конденсирующего вещества, например, 2 этокси-1-этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолина. Реакцию обычно можно осуществлять в течение времени от 8 до 24 часов. Реакцию обычно проводят при температуре от 15 до 30 С, предпочтительно при комнатной температуре в течение 15-ти часов затем конъюгат можно осадить ацетоном, растворить в этаноле и переосадить ацетоном. Например, полимер, в котором 2 представляет(а) остаток активного эфира, обеспеченный при концентрации 14(вес/об.) в безводном диметилсульфоксиде, обрабатывают производным 20-0-аминоацилкамптотецина формулы 7, в количестве 3(вес/об.) при комнатной температуре в течение 15 часов. Затем добавляют 1-амино-2-пропанол,0,1(вес/об.), и реакционную смесь поддерживают при комнатной температуре в течение 1 часа. Конъюгат можно осадить ацетоном, затем растворить абсолютным этанолом при концентрации 10(вес/об.) и осадить опять ацетоном для получения нейтрального камптотецинового конъюгата согласно изобретению. В другом примере полимер, в котором 2 представляет (в) гидрокси, обеспеченный при концентрации 15(вес/об.) в безводном диметилсульфоксиде, обрабатывают производным 20-0-аминоацилкамптотецина формулы 7, 3(вес/об.), в присутствии 2-этоски-1-этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолина, 1,3(вес/об.) при комнатной температуре в течение 15-ти часов. Затем, чтобы вызвать осаждение,добавляют ацетон, осадок растворяют абсолютным этанолом при концентрации 10(вес/об.) и опять производят осаждение путем добавления ацетона до получения полимерного конъюгата в соответствии с изобретением. Содержание активного лекарственного вещества,например, камптотецина или его А-кольцевого аналога, в полимерных конъюгатах изобретения определяют НРС (жидкостной хроматографией высокого давления) или спектроскопическим анализом. Полимерные конъюгаты камптотецина и его Акольцевые аналоги, описанные в настоящем изобретении, наделены улучшенной водорастворимостью и пониженной токсичностью. Конъюгаты проявляют 9773 хорошую водорастворимость, биосовместимость и выделяют камптотецин в плазму или после усвоенияв клетки путем ферментативного расщепления. Биологическая активность Сополимер -(2-гидроксипропил)метакриламида, 20-0-(-метакрилоилглицил)камптотецина и (2-лейцилглицил)камптотецина и -(2-гидроксипропил)метакрилоилглицинамида (А 2) испытывали на голой мыши, которой сделали пересадку рака толстой кишки/НТ 29 (табл. 1), и на преждевременно рожденной мыши с запущенной мышиной ретикулоклеточной саркомой М 5076 (табл. 2 и 3) в сравнении со свободным камптотецином (СРТ). При сравнении с камптотецином для производной полимерносвязанного камптотецина А 2 наблюдали во всех экспериментах более высокую ударную активность. Заслуживает внимания тот факт, что в эксперименте с раком толстой кишки /НТ 29 обнаружили вылеченную мышь. Противоопухолевую активность испытывали при той же самой схеме лечения для А 2 и СРТ. Следует отметить, что было найдено, что полимерносвязанный камптотецин А 2 легко растворим в воде и растворим в физиологическом растворе и его вводили внутривенно, тогда как СРТ растворяли в смеси воды и Т 80. Получение лекарства и его введение Соединение А 2 непосредственно перед использованием растворяли в дистиллированной воде и концентрацию проверяли спектрофотометрически при 370 нанометрах (Е 157,18). Камптотецин (СРТ) растворяли в дистиллированной воде 10 раствором Т 80. Введение осуществляли внутривенно в количестве 10 мг/кг массы тела, а контрольную мышь подвергали обработке дистиллированной водой. Опухоли Рак толстой кишки пересадили подкожно швейцарской голой мыши, используя 15-20 мг опухолевых клеток. Мышиную ретикулоклеточную саркому М 5076 поддерживали путем последовательных внутримышечных пассажей и подкожной пересадки(5 х 105 клеток/мышь) сходной мыши С 57 В 1/6. Все животные были от Италия. Использовали 10 обычных мышей/группа и 8 мышей с атимией. Обычные мыши весили от 20 до 22 г и их поддерживали при стандартных лабораторных условиях. Мышиную колонию при определенном режиме испытывали на отсутствие антител, согласно перечню патогенных микроорганизмов, включая гепатит, вирус и. Оценка противоопухолевой активности и токсичности. Развитие опухоли определяли посредством штангенциркуля, и вес опухоли подсчитывали согласно. (смотри. .3,3(2). 3, -103, 1972). Противоопухолевую активность выражали в виде процентного содержания угнетения роста опухоли ( Т/1), используя следующую формулу 100- (средний вес опухоли подвергнутой лечению мыши) х 100.(средний вес опухоли контрольной мыши) Среднее увеличение времени жизни (Т/С ) вычисляли, используя следующую формулу(среднее время жизни подвергнутой лечению мыши) х 100.(среднее время жизни контрольной мыши) Вылеченными мышами были мыши без опухоли в конце эксперимента. Токсичность оценивали на основе уменьшения массы тела и макроскопических данных аутопсии, главным образом с точки зрения уменьшения размера селезенки и печени. Таблица 1 Противоопухолевая активность соединения А 2 в сравнении с камптотецином (СРТ) против рака толстой кишки НТ/29 Соединение А 2 Выражено в виде эквивалента СРТ. Количество смертных случаев от токсичности/общее количество/мышей. 3 Мыши, не имеющие опухоли через 90 дней после имплантации опухоли. 2 9773 Таблица 2 Противоопухолевая активность соединения А 2 в сравнении с камптотецином (СРТ) против ранней мышиной ретикулоклеточной саркомы М 5076 Соединение Выражено в виде эквивалента СРТ. Количество смертных случаев от токсичности/общее количество мышей. 3 угнетения роста опухоли оценивали через одну неделю после последней терапии. 2 Таблица 3 Противоопухолевая активность соединения А 2 в сравнении с камптотецином (СРТ) против прогрессирующей мышиной ретикулоклеточной саркомы М 5076. Схема применениявнутривенная терапия на 16, 20, 24, 28, 31 и 35 день Соединение А 2 СРТ Выражено в виде эквивалента СРТ. Количество смертных случаев от токсичности/общее количество мышей. 3 угнетения роста опухоли оценивали на 34-й день. 2 Токсичность Токсичность сополимера -(2-гидроксипропил) метакриламида, 20-0-(-метакрилоилглицинафе нилаланиллейцилглицил)камптотецина и -(2 гидроксипропил)метакрилоилглицинамида (А 2) оценивали на здоровых мышах С 57 В 1/, вводя его внутривенно, в сравнении с камптотецином (СРТ). Значения 101 и 502 для мышей С 57 В 1/ были следующими 50, мг/кг Соединение 10, мг/кг А 2 129 151 СРТ 16,9 43,4 1 10 доза, включающая 10 мертвых мышей. 50 доза, включающая 50 мертвых мышей. Низкая токсичность производного полимерносвязанного камптотецина А 2 дает возможность применять повышенные дозы продукта и достигать эквивалентных или улучшенных результатов по сравнению с камптотецином. Полимерносвязанные камптотецины обладают противоопухолевой активностью. Они ингибируют топоизомеразу 1. Они пригодны для лечения лейкемии и в особенности опухолей толстой и прямой кишки. Следовательно, можно лечить человека или животного способом, включающим введение им терапевтически эффективного количества полимерного конъюгата изобретения. Таким образом можно улучшить состояние человека или животного. Диапазон принимаемой дозы зависит от способа применения лекарственного средства, от возраста,2 веса и состояния пациента, подвергнутого лечению. Полимерные конъюгаты обычно вводят парентеральным путем, например, внутримышечно, внутривенно или в виде шарика. Подходящий диапазон дозы составляет от 1 до 1000 мг камптотецина на м 2 площади поверхности тела, например, от 10 до 50 мг/м 2. Полимерные конъюгаты вместе с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем могут образовать лекарственные препараты. Обычно полимерные конъюгаты создают для парентерального введения, например, путем растворения в воде для инъекции или физиологического раствора. Последующие примеры иллюстрируют изобретение без ограничения его. По всему описанию аминокислотные остатки показаны трехбуквенным кодом,в соответствии с Е 138, 9-37, 1984. Устойчивость полимерных конъюгатов в мышиной плазме или плазме крови человека оценивали следующим образом к 1 мл мышиной плазмы или плазмы крови человека добавили различные концентрации полимерного конъюгата изобретения А и в соответствующие периоды времени (24, 48, 72, 96 часов) собрали 100 мл пробы и хранили при 70 С до дальнейшей обработки. Каждую пробу экстрагировали путем добавления 100 мл 0,25 М фосфорной кислоты, 500 мл СН 3 С и 700 мл этилацетата и энергичного встряхивания в течение 20 минут при 4 С. После этого пробу центрифугировали при 15000 х г в течение 10 минут и верхний слой отделяли. К остатку добавляли 300 мл СН 3 С и 500 мл центрифугировали при 15000 х г в 9773 течение 10 минут. Верхний слой отделяли. Органические фазы объединяли и выпаривали, используя высоковакуумную центрифугу. Пробу извлекали путем добавления 500 мл МеОН/вод рН 2 (70/30 по объему) и инжектировали в аппаратуру для жидкостной хроматографии высокого давления для определения общего процентного содержания лекарства. Система НР колоннаС 103,9 х 300 мм скорость потока 1,5 мл/мин детектор спектрофотометрическая флюоресценция 650-40 ( ) эмиссия 434 мн(щель 5) инжекция 10 л подвижная фаза 51,5 МеОН 47,5 воды 1 фосфорной кислоты Пример 1 6 тритилгексаноил-п-нитрофениловый эфир(75 мл) и сухого ацетонитрила (15 мл) добавляли к триметилсилихлориду (6,3 мл, 50 миллимолей) и держали под флегмой в течение 2 часов при сильном перемешивании. После этого смесь охлаждали и добавляли один за другим триэтиламин (13,7 мл,100 миллимолей) и тритилхлорид (14 г, 50 миллимолей), растворенный в сухом хлороформе (100 мл). Смесь выдерживали при комнатной температуре всю ночь, затем добавляли метанол (10 мл) и реакционную смесь концентрировали под пониженным давлением. Остаток промывали холодным 5 водным раствором лимонной кислоты (200 мл) и экстрагировали этилацетатом (200 мл). Органическую фазу отделяли и экстрагировали холодным 1 водным раствором гидроксида натрия(200 мл). Водную фазу отделяли, охлаждали льдом,уксусной кислотой доводили рН до 5 и экстрагировали этилацетатом (2 х 100 мл). Органический растворитель удаляли под пониженным давлением для получения 6 тритилкапроновой кислоты (16 г) после кристаллизации из этилацетата. Это вещество растворяли в безводном тетрагидрофуране (150 мл) и обрабатывали р-нитрофенолом (5,6 г, 400 миллимолей) и дициклогексилкарбодиимидом (8,4 г,40 миллимолей) при 0 С в течение 1 часа при перемешивании, затем всю ночь при 8 С. После этого реакционную смесь отфильтровывали, охлаждали при 0 С в течение 2-х часов и фильтровали. В конечном счете органический растворитель удаляли под пониженным давлением и остаток кристаллизовали этиловым эфиром для получения названного соединение 8 с (16,4 г). Осуществляли Т (тонкослойную хроматографию) на пластинах 245 и элюировали систему этиловым эфиром/н-гексаном (11 по объему) 0,6(0,24 г, 2 милимоля). Реакционную смесь поддерживали при комнатной температуре в течение 48 часов,затем разбавили хлороформом (400 мл) и промывали водой (3 х 100 мл). Органическую фазу отделяли,сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали до маленького объема под пониженным давлением. Необработанный продукт подвергали мгновенной хроматографии на колонке с кремниевой кислотой при элюировании хлороформом до получения 20-0(6 тритилгексаноил)камптотецина (0,6 г). Осуществляли Т (тонкослойную хроматографию) на пластинах 245 при элюировании системы хлороформом/метанолом (955) по объему) 0,4. -защищенное производное обрабатывали 95 трифторуксусной кислотой (10 мл) при комнатной температуре в течение 50 минут. После удаления кислоты под пониженным давлением названное соединение 7 а собирали этиловым эфиром. Выход составил 0,4 г. Осуществляли тонкослойную хроматографию на пластинах 245 при элюировании системы метиленхлоридом/метанолом/уксусной кислотой/водой (8020 73). 0,6 -//Н) 462. Пример 3 20-0-(-фенилаланиллейцилглицил)камптотецин (7)-тритилфенилаланиллейцилглицил-п-нитрофениловый эфир (8 а, 1,4 г, 2 милимоля), полученный, как было ранее описано в заявке Великобритании 9309663.4, камптотецин (6 а, 1 Н, 0,35 г,1 милимоль) и 4-диметиламинопиридин (0,12 г,1 милимоль) растворяли сухим диметилсульфоксидом (50 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 20 часов. После этого реакционную смесь разбавляли хлороформом (400 мл) и промывали водой (3 х 100 мл). Органическую фазу отделяли, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали до маленького объема под пониженным давлением. Необработанный продукт подверга 7 9773 ли мгновенной хроматографии на колонке с кремниевой кислотой при элюировании смесью хлороформа и метанола (99,5/0,5 по объему). Собирали фракции, содержащие -защищенное производное названного соединения, концентрировали до остаточного влагосодержания, растворяли в 75 водном растворе уксусной кислоты (30 мл) и поддерживали при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакционную смесь обрабатывали твердым кислым углекислым натрием до рН 7 и экстрагировали хлороформом (400 мл). После удаления органического растворителя названное соединение 7 выкристаллизовывали из этилового эфира. Выход составил 0,16 г. Осуществляли тонкослойную хроматографию на пластинах 245 при элюировании системы хлороформом/метанолом (91 по объему) После того как -тритилфенилаланил-лейцилглицин-п-нитрофениловый эфир (8 а, 1,14 г,2 милимоля), 9-аминокамптотецин (6 в, 2,0,363 г, 1 милимоль), 4-диметиламинопиридин(0,12 г, 1 милимоль) провзаимодействовали в сухом диметилсульфоксиде (20 мл) при комнатной температуре, как описано в примере 3, до получения названного соединения 7 с (0,31 г), осуществили тонкослойную хроматографию на пластинках 245 , систему элюировали хлороформом/метанолом (91 по объему) 0,2 После того как сополимер -(2-гидроксипропил)метакриламида и -метакрилоилглицин-п-нитрофенилового эфира (0,15 г), полученный, как описано в . ., 178, 2159 (1977), и содержащий 2,7 х 103 эквивалентов п-нитрофенилового эфира, провзаимодействовал с 20-0-(6-аминогексаноил)камптотецином (7 с, 18 мг), полученным,как описано в примере 2, в сухом диметилсульфоксиде (1 мл) при комнатной температуре в течение 18 часов, а затем с 1-амино-2-пропанолом (2 мл) в течение 1 часа при комнатной температуре, реакционную смесь обработали ацетоном (70 мл). Осадок собрали, опять растворили в безводном этаноле(5 мл) и повторно осадили ацетоном (50 Мл) до получения названного конъюгата А 1 (0,14 г), содержащего 5(вес/вес) камптотецина. После инкубации плазмы конъюгат А 1 выделили через 120 часов 10 камптотецина. Пример 6 Сополимер -(2-гидроксипропил)метакриламида, 20-0-/-метакрилоилглицилфенилаланил-лейцилглицил/камптотецина и -(2-гидроксипропил)метакрилоилглицинамида После того как сополимер -(2-гидроксипропил)метакриламида и -метакрилоилглицин-п-нитрофенилового эфира (0,15 г, содержащий 2,7 х 103 эквивалентов п-нитрофенилового эфира) и 20-0(глициллейцилфенилаланил)камптотецин (7 в,20 мг), полученный, как описано в примере 3, провзаимодействовали в сухом диметилсульфоксиде(1 мл), а затем с 1-амино-2-пропанолом, как описано в примере 6, было получено 0,14 г названного конъюгата А 2, содержащего 4,8 вес. камптотецина. После инкубации плазмы конъюгат А 2 через 60 часов выделил 10 камптотецина. Пример 7 Сополимер -(2-гидроксипропил)метакриламида, 9-амино-20-0-/-метакрилоилглицилфенилаланиллейцилглицил/камптотецина и -(2-гидроксипропил)метакрилоилглицинамида Композиции на основе полимерного конъюгата,содержащего камптотецин, готовили с помощью следующей нижеописываемой процедуры. Соответствующие соотношения компонентов, используемые в композиции, были такими, как указано ниже (количества приведены в расчете на флакон) А 2 1000 мг(эквивалентно приблизительно 50 мг камптотецина) Лактоза 500 мг Полисорбат 80 10 мг Вода для инъекций до 20,0 мл Лактозу, полисорбат 80 и А 2 последовательно растворяли при перемешивании в , деаэрировали, барботируя азот (около 80 от конечного требуемого объема воды). Полученный раствор затем доводили до конечного объема оставшимся количеством Затем раствор фильтровали в стерильных условиях через 0,22 м микропористую мембрану. Дозы раствора объемом по 20 мл были стерильно разлиты в стерильные флаконы типа 1 из бесцветного стекла емкостью 50-57 мл. Растворы во флаконах замораживали при температуре -40-45 С в течение 4-5 часов. Затем проводили лиофилизацию, сушку продукта на конечной стадии при 40 С в течение 5-6 часов. Флаконы закрывали и запаивали, а высушенные замораживанием осадки восстанавливали свой состав при введении стерильной воды или раствора хлорида натрия. Аналогично готовят идентичные композиции на основе содержащих камптотецин полимерных конъюгатов А 1 и А 3. Названный конъюгат получили путем взаимодействия сополимера -(2-гидроксипропил) метакриламида и -метакрилоилглицин-п-нитрофенилового эфира (0,15 г, содержащий 2,7 х 103 эквивалентов п-нитрофенилового эфира) и 9-амино-20-0-(Глициллейцилфенилаланил)камптотецина(7 с,20 мг, полученного, как описано в примере 4, в сухом диметилсульфоксиде (1 мл), затем 1-амино-2 пропанолом, как описано в примере 5. Выход продукта, содержащего 6,3 вес/вес 9 аминокамптотецина, составил 0,14 г. После инкубации плазмы конъюгат А 3 через 50 часов выделил 100 камптотецина. Пример 1. Композиция ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Полимерный конъюгат камптотецина, который является водорастворимым и обладает противоопухолевой активностью, отличающийся тем, что состоит в основном из,(2) в которой группаявляется пространственной группой, имеющей соответствующие концевые амино- и карбонильные группы, которые разделены, по 9 9773 крайней мере, тремя атомами, и О-СРТ представляет собой остаток камптотецина формулы 6(6),в которойпредставляет собой водород или 2 в положении 9 молекулы камптотецина, при этом С 20-гидроксигруппа камптотецина связана с концевой карбонильной группой пространственной группы, аотмечена связь С-20-гидроксильной группы камптотецина с концевой карбонильной группой пространственной группыи 23. 2. Конъюгат по п. 1, отличающийся тем, что пространственную группувыбирают из , -, -, -, -, -,-, -, , , -, , , и. 3. Конъюгат по п. 1, отличающийся тем, что пространственная группапредставляет собой группу формулы , в которойявляется С 3-С 6 линейной или разветвленной алкильной группой или , ,, , , , ,, , , , , , или ,в которойимеет те же значения, которые указаны выше. 4. Конъюгат по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что О-СРТ представляет собой камптотециновый остаток формулы 6,(6) в которойпредставляет собой водород или 2 в положении 9 молекулы камптотецина, аотмечена связь С-20 гидроксильной группы камптотецина с концевой карбонильной группой пространственной группы . 5. Конъюгат по одному любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что в нем присутствует от 1 до 10 мол. звеньев формулы 2. 6. Конъюгат по одному любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что содержание камптотецина составляет от 1 до 10(вес/вес). 7. Фармацевтическая композиция, обладающая противоопухолевой активностью, содержащая активный ингредиент и фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель, отличающаяся тем, что в качестве активного ингредиента содержит эффективное количество полимерного конъюгата камптотецина по любому из пп. 1-6.