Производное пептида, способ лечения рака у пациента

(51)7 07 14/575, 07 14/655, 61 38/04, 61 38/22, 61 38/31 НАЦИОНАЛЬНОЕ ПАТЕНТНОЕ ВЕДОМСТВО РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(54) ПРОИЗВОДНОЕ ПЕПТИДА, СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ РАКА У ПАЦИЕНТА(57) Изобретение относится к производным пептидов и способам лечения заболевания пациента и может быть использовано при лечении рака, акромегалии, панкреатита, диабета и других заболеваний. Изобретение позволяет создавать производные биологически активных пептидов, содержащие один или несколько заместителей. Пептидный остаток присоединен к каждому из заместителей связью-, СН 2 или 2, расположенной между заместителем и атомом азота -окончания или боковой цепочки пептидной среды. В модифицированном виде производные пептидов имеют более высокую и продленную биологическую активность, чем соответствующий немодифицированный пептид. Производные пептиды недороги, в высшей степени биологически совместимы, лишены вредных побочных явлений и совместимы с другими терапевтическими средствами. Многие производные в качестве пептидного остатка включают соматостатин и его аналоги и производные. Производное пептида может быть димерным, содержащим два пептидных остатка и несколько заместителей. 9779 Изобретение относится к терапевтическим пептидам. Было предпринято несколько попыток продлить активность биологически активных пептидов. Например, пептиды модифицировались химически путем синтетического добавления сахарной среды для увеличения периода, в течение которого пептид является активным (Сандоз,88/02756 Сандоз,89/097863910667 А 1, ЕРО 0 374 089 2 (1990) и Брейпол, патент США 4.861.755 (1989). Добавление катионных анкеров (ЕРО 0 363 589 2 (1990 и липидной среды (Уиттейкер,91/09837 Джанг,патент США 4.837.303 (1989 также использовалось для увеличения времени жизни пептида. В общем смысле настоящее изобретение позволяет создавать производные биологически активных пептидов, которые содержат один или несколько заместителей, отдельно соединенных с аминогруппой, размещенной на -оконечном конце или боковой цепочке пептидного остатка В этом модифицированном виде производные имеют более высокую и продленную биологическую активность, чем соответствующий немодифицированный пептид. Производные пептидов выгодны тем, что они недороги, в высшей степени биологически совместимы, лишены вредных побочных эффектов и совместимы с разными видами терапевтического приема. В частности, многие производные, имеющие соматостатин в качестве пептидного остатка значительно усилили действие и селективность по сравнению с немодифицированным соматостатином. В одном аспекте изобретение характеризует производное пептида, содержащее, биологически активный пептидный остаток и, как минимум, один заместитель, прикрепленный к пептидному остатку,заместитель выбирается из группы, включающей соединения ,и , где соединение- это 1(2-7)ацил, и каждое 7 и 8, независимо, - это Н,(С 2-С 7)ацил или (9)(10), где каждое 9 и 10, независимо, этоили (1-6)алкил, или каждое 1 и 2 - это 211, где в 11 каждое 1 и 2, независимо, - этоили (2-7)ацил, и- это целое число между 1 и 5, включительно и одно из 3 или 4 - это (2)12, или(2)12, где 12 - это , 2 или 2, и- это целое число между 1 и 5, включительно и остающиеся 3 или 4 - это Н, (1-6) гидроксиалкил или (2-7)ацил и соединение- это(2-24) ацил 16 - этоили отсутствует 17 - это СО, или отсутствует 18 - это СО, С 2, 2 или отсутствует и- это целое число между 1 и 5, включительно и- это целое число между 0 и 5, включительно и соединение- это(1-6)алкил 20 - это О или отсутствует 21 - это (1-С 6) алкил или отсутствует 22 - это , ,или 23 - это (1-6)алкил или отсутствует 24 - это , СН или С 25 -это ,или отсутствует 26 - это 2, С, СН 2 или отсутствует- это целое число между 0 и 5, включительно- это целое число между 0 и 5, включительно- это целое число между 0 и 5, включительно и- это целое число между 0 и 5, включительно. В соединениях ,ипептидный остаток прикреплен к каждому из заместителей посредством связи -, 2- или 2 между заместителем и атомом азота -окончания или боковой цепочкой этого пептидного остатка. В предпочтительных примерах осуществления изобретения 23 - это (1-6)алкил 22-это , С илии 24 - это . В качестве альтернативы, 22 - это О 18, 20,21, -23 - отсутствуют и суммаи - это 3, 4 или 5. В других предпочтительных примерах осуществления изобретения заместитель - это соединениев этом примере 12 - это предпочтительно 2 или 2. В качестве альтернативы, заместитель может быть соединением , и в этом случае 18 - это предпочтительно 2 или 2 13, 14, 15 - этои 17 отсутствует. В особенно предпочтительных примерах осуществления заместитель - это (НОСН 2)3 СМН-(СН)2-2 или (НОСН 2)3 С-СН 2. Еще в других примерах осуществления изобретения заместитель - это соединениепредпочтительно в этом примере -23- отсутствует и, как минимум, одно из 22 и 24 - это . В качестве альтернативы, оба 22 и 24 могут быть . 9779 В других примерах заместитель - это одно из Предпочтительно, пептидный таток выбирается из группы, включающей в себя соматостатин,бомбезин, кальцитонин, пептид, связанный с геном кальцитонина , амилин, гормон паратироид(РТН), высвобождающий гастрин пептид ,стимулирующий меланоцит гормон , адренокортикотрофный гормон (АСТН), связанный с паратироидом пептид (РТНР), лютеинизирующий высвобождающий гормон гормон. , высвобождающий гормон роста фактор , высвобождающий гормон роста пептид , холецистокинин (ССК), глюкагон, Брадикинин, глюкагонподобный пептид , гастрин, энкефалин, нейромедины, эндотелин, вещество Р, нейропептид, пептид, вазоактивный кишечный пептид , гуанилин, полипептид, активирующий слизистую аденилатную циклазу (РАСАР), бетаклеточный тропин, адреномедулин и их производные, фрагменты и аналоги. Пептидный остаток - это предпочтительно соматостатин или его производная, фрагмент или аналог. Наиболее предпочтительный аналог соматостатина это одно из -2,2 и - -2. В качестве альтернативы, пептидный остаток - это бомбезин или его производное, фрагмент или аналог. В еще других предпочтительных примерах осуществления производное пептида - это одно из и атомом азота -окончания или боковой цепочкой одной из пептидных сред. В еще одном аспекте изобретение включает в себя способ лечения заболевания, такого как рак, у пациента этот способ включает этап принятия пациентом терапевтического количества описанных здесь производных пептида. В предпочтительных примерах осуществления пептидный остаток, используемый при лечении, - это соматостатин. Под используемым здесь понятием биологически активный имеется в виду встречающийся в природе, рекомбинантный и синтетический пептид,имеющий физиологическую или терапевтическую активность. В общем смысле этот термин включает в себя все производные, фрагменты и аналоги биологически активных пептидов, проявляющих качественно аналогичный или противоположный эффект эффекту, производимому немодифицированным пептидом. Сущность изобретения поясняется чертежом. Фиг. - это график двух кривых роста клеток 42 в присутствии разных производных соматостатина. Производные пептидов В общем случае, производные пептидов, согласно этому изобретению, содержат два отдельных компонента 1) биологически активный пептид и 2) как минимум, один заместитель, имеющий структуру соединений , , и . Производные пептидов,полученные согласно описанным здесь способам,включают следующие вещества. Производные на основе соединения 1 В другом аспекте изобретение предполагает димерное производное пептида, содержащее два биологически активных пептидных остатка и, как минимум, один заместитель, прикрепленный к каждому из этих пептидных остатков. Заместитель выбирается из группы, состоящей из соединенийи , где соединениеимеет общую, а соединениеимеет общую структуру, эквивалентную соединению . В димере каждый из пептидных остатков присоединен к заместителям посредством связи -, 2- между заместителем где о, 1, 2, 3, 4, 12 и- это те, которые здесь были определены, а - - это биологически активный пептидный остаток. В этих примерах осуществления группаразмещена на -терминальном конце или боковой цепочке пептида и Р представляет собой остаток пептида. Производные на основе соединения где 13, 14, 15, 16, 17, 18, ,и - - это те,что здесь определяются. Производные на основе соединения- - это те, что определяютя здесь. В добавление к показанным выше структурам соединения, получаемым согласно изобретению,включают пептидные производные, содержащие два или большее число заместителей, прикрепленных к одному пептидному остатку. Эти примеры осуществления изобретения являются производными биологически активных пептидов, имеющих более чем одну свободную амино-группу, например, радикал лизина. Это изобретение также предполагает наличие димерных производных пептидов, содержащих два пептидных остатка, связанных с одним заместителем, например, два аналога брадыкинина, связанные с заместителем соединения . Производные пептидов этого изобретения - это производные биологически активных пептидов, выбираемых из следующей группы соматостатин,бомбезин, кальцитонин, пептид, связанный с геном кальцитонина , амилин, гормон паратироида(РТН), высвобождающий гастрин пептид ,стимулирующий меланоцит гормон , адренокортикотропный гормон (АСТН), связанный с паратироидом пептид (РТНР), лютеинизирующий высвобождающий гормон гормон , высвобождающий гормон роста фактор , высвобождающий гормон роста пептид , холецистокинин (ССК), глюкагон, брадыкинин, глюкагонподобный пептид , гастрин, энкефалин, нейромедины, эндотелии, вещество р, нейропептид, пептид, вазоактивный кишечный пептид , гуанилин, активирующий слизистую аденалатную циклазу полипептид (РАСАР), бетаклеточный тропин, адреномедулин или производные, фрагменты или аналоги вышеприведенных. В особенно предпочтительных примерах осуществления пептидная среда - это соматостатин или производное, фрагмент или аналог соматостатина. Аналоги соматостатина, которые можно использовать в связи с этим изобретением включают в себя следующие вещества, не ограничиваясь ими,гдеуказывает на амидный мостик, образованный междуи . Перечисленные выше пептидные соединения описаны в следующих ссылках. Заявка ЕР .5 164 Ван-Бинст, Г. и др. Исследования пептидов 58 (1992) Хорват, А. и др. Реферат Структуры аналогов соматостатина,имеющих противоопухолевую активность, 22-й Европейский симпозиум по пептидам, 13-19 сентября 1992, Интерлакен, Швейцария заявка РСТ 09109056 (1991) заявка ЕР 0 363 589 А 2 (1990) заявка ЕР 0 203 031 2 (1986) патенты США 4.904.642 4.871.717 4.853.371 4.725.577 4.684.620 4.650.787 4.603.120 4.585.755 4.522.813 4.486.415 4.485.101 4.435.385 4.395.403 4.369.1794 4.360.516 4.358.439 4.328.214 4.316.890 4.310.518 4.291.0224 4.238.481 4.235.886 4.224.190 4.211.693 4.190.648 4.146.612 и 4.133.782. В перечисленных выше аналогах соматостатина каждый радикал аминокислоты имеет структуру, в которойэто боковая цепочка черточки между радикалами аминокислоты представляют собой пептидные связи, которые соединяют аминокислоты. Когда радикал аминокислоты оптически активен, он имеет конфигурацию формы, которая предполагается, если только однозначно не указана форма . Когда два радикалаприсутствуют в пептиде, дисульфидный мостик образуется между двумя средами. Однако эта связь не показана в перечисленных радикалах. Дополнительно предпочтительные аналоги соматостатина согласно изобретению имеют следующую формулу 1 1 -2 -36 -7- 8-3 2 где 1 - это - или -изомер - , , -пиридил, , замещенныйили отсутствует и каждое А 2 и А 7, независимо, - это ,или . Эти среды ковалентно связаны друг с другом посредст 5 9779 вом дисульфидного мостика или амидного мостика. Кроме того, А 3 - это- ,или о-, - или р-замещенное -, где Х - это галоген, ОН, 2,2 или С 1-3 алкил А 6 - это , , , , , -, , , , илии 8 - это , ,- , или группа спиртов, или отсутствует каждое 1 и 2, независимо, - это Н,низший ацил или низший алкил и 3 - это ОН, 2 или отсутствует. Предпочтительно, когда одно из А 2 и 7 - это , другое тожекогда А 8 - это альфаамино спирт, 3 отсутствует и когда ни 2 и ни А 7 это не , 2 отлично от А 7. Особенно предпочтительными аналогами соматостатина в этом примере осуществления изобретения являются. В других примерах осуществления линейные аналоги соматостатина этого изобретения имеют следующую структуру 1 1 -2 -36 -7- 8-3 2 где А 1 - это - или - изомер , , , , , -, - - пиридил-, , , 2,4 дил-, пентафторо-, или ,где- это СН 3, , , , ОН, ОСН 3, или 2 2 - это , , , , , ,- , пиридил-, , 2,4-дихлоро-, пентафторо-, -, или , гдеэто СН 3, , , , ОН,ОСН 3, или 2 3 - это пиридил-, , , -, 2,4 дихлоро-Ре, пентафторо-, или р-Х, где- это СН 3, С 1, , , ОН, ОСН 3, или 2 А 6 - это , , , , , ,или 7 - это , , , , , , -, пиридил-, , 2,4-дихлоро-, пентафторо-, - или р-Х-, где- это СН 3, С, , , ОН,ОСН 3, или 2 8 - это - или -изомер , , , , , , -, пиридил-, , 2,4-дихлороР пентафторо- , р-Х- или ,- это СН 3, С, , , ОН, ОСН 3, или 2 или их спирт и каждое 1 и 2, независимо, - это Н, низший ацил или низший алкил и 3 - это ОН, 2 или отсутствует. Предпочтительно, как минимум, одно из А 1 и А 8 и одно из А 2 и А 7 должно быть ароматической аминокислотой и когда А 8 - это спирт, 3 отсутствует. Кроме того, А 1, А 2, А 7 и А 8 не могут все быть ароматическими аминокислотами. К числу особенно предпочтительных аналогов в этом аспекте изобретения относятся 2. В еще других предпочтительных примерах осуществления пептидный отаток - это бомбезин или его производное, фрагмент или аналог. К числу аналогов бомбезина, которые можно использовать для осуществления этого изобретения, относятся, не ограничиваясь этим, Нейромедин С, Нейромедин В,литорин и высвобождающий гастрин пептид ,имеющий следующую последовательность аминокислот 2 Другие аналоги бомбезина, которые можно использовать в этом изобретении, включают в себя соединения, описанные в следующих ссылках Кой и др. Пептиды. Труды 11-го Американского симпозиума по пептидам, под ред. Ривьера и др. ЕСОМ, с. 65-67 (1990) Уэнг и др. .,265 15695 (1990) Махмуд и др. Исследования в области рака, 511798 (1991) Уэнг и др. , 29616 (1990) Хаймбрук и др. Синтетические пептиды. Подходы к биологическим проблемам,.. ., .86, под ред. Тэма и Кайзера Мартинес и др., 281874. . . 155359 (1988) Ривьер и др.,. 171766 (1978) Каттитта и др. Обзоры раковых болезней 4707 (1985) Омилас и др., .(1992) заявки Англии 1 231 051(1990). Пептиды этого изобретения могут получаться в виде фармацевтически приемлемых солей. Приме 9779 рами предпочтительных солей являются те соли,которые имеют терапевтически приемлемые органические кислоты, например, уксусную, молочную,малеиновую, лимонную, маловую, аскорбиновую,сукциновую, бензойную, салициловую, метансульфокислоту, толуолсульфокислоту, или памоиновую кислоту, а также полимерные кислоты, такие как дубильная кислота, или карбоксиметил-целлюлоза и соли с неорганическими кислотами, такими как гидрогальные кислоты, включая соляную кислоту, серную кислоту и фосфорную кислоту. Теперь описывается синтез соединений ,и . При описании синтеза соединений согласно этому изобретению используются следующие сокращения- нафтилаланин (1 или 2), - альфа-аминомасляная кислота, - правовращающий, - левовращающий,НОАС - уксусная кислота,ВОР бензотриазол-1-илокситрис(диметиламино)фосфоний гексафторофосфат,ВОС - трет-бутилоксикарбонил- дициклогексил карбодиимид, - 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид, - диэтилцианофосфонат, - диметилформамид,СН 22 - дихлорметан,МеОН - метанол, - этанол, - , -диизопропилэтиламин,НОВТ - 1 - гидроксибензотриазол, - О-бензотриазол-1-ил-тетраметилуроний гексафторофосфат,ТН - тетрагидрофуран, - трифторуксусная кислота. Исходные и промежуточные материалы для получения соединений ,идоступны коммерчески. В качестве альтернативы, исходные материалы можно легко приготовить методами, которые хорошо известны и содержатся в литературе. Например,химию производных, связанных с аскорбиновой кислотой, можно найти в. .(1978), 86 376 (1966) в патенте США .4.552.888 . . , 31 793 (1988) там же 34 2152 (1991) и 35 1618 (1992). Химию этих трис-связанных производных можно найти в . . , 96, 653 (1962),., 5, 467 (1996). СИНТЕЗ ПРОИЗВОДНЫХ ПЕПТИДОВ В общем смысле, присоединение соединений ,илик соответствующей свободной амино-группе защищенной аминокислоты или пептида можно достичь согласно хорошо известным методам, используемым для синтеза пептидов (например, ,-, -НОВТ РРА, -, ,ВОР, ) с использованием основы (например) в инертном растворителе (например, , или СН 22 этил ацетат или их комбинация). Деблокирование защищенных групп тоже может производиться хорошо известными методами (например, удалением группы путем добавления кислоты или основы, , диоксан-Н, аммиака пиперидина). В большинстве случаев температура реакции должна быть в диапазоне от -30 С до комнатной температуры. В основном, первый этап синтеза предполагает реакцию между эпоксидом и свободной аминогруппой защищенной аминокислоты или пептида комплексацию и снятие защиты можно достичь с использованием хорошо известных методов, таких как описанные Мак-Мэнусом и др., .3, 177 (1973). После синтеза очистку промежуточных веществ и продуктов можно достичь обычными методами, такими как хроматография или . Соединения можно идентифицировать обычными способами, такими как ЯМР, анализ аминокислот и масс-спектрометрия. Следующие примеры показывают предпочтительные способы образования соединений этого изобретения. ПРИМЕР 1 СИНТЕЗ ПРОИЗВОДНЫХ СОМАТОСТАТИНА Производное соматостатина, называемое здесь ВМ-23118, было синтезировано в соответствии с этим изобретением. Пример 1,1 - 3-0-(бензилоксикарбонилметил)2,5,6-триацетиласкорбиновая кислота. Ангидрид уксусной кислоты (6 мл) добавляется по каплям к раствору 3-0-(бензилоксикарбонилметил)-аскорбиновой кислоты (2,2 г) в пиридине(30 мл) затем смесь перемешивалась половину суток при комнатной температуре. Пиридин испарялся при пониженном давлении, оставляя остаток, который затем разделялся между этилацетатом иН. Слой этилацетата промывалсяН и затем водой. После сушки (4) этилацетат испарялся при пониженном давлении следы пиридина и ангидрида уксусной кислоты, которые еще оставались, удалялись многократным совместным испарением с толуолом. Получавшаяся 3-0-(бензилоксикарбонилметил)-2,5,6-триацетиласкорбиновая кислота просушивалась в вакууме, давая вязкий гель, остававшийся в остатке (2,4 г). ТСХ (силикагель СН 3/ацетон 91, 0,52). Пример 1,2 - 3-0-(карбоксиметил)-2,5,6-триацетиласкорбиновая кислота. Суспензия - (100 мг) в воде (2 мл) добавлялась к раствору 3-0-(бензилоксикарбонилметил)2,5,6-триацетиласкорбиновой кислоты (2,4 г) в этаноле (30 мг) и суспензия встряхивалась в водороде(17 фунтов на кв. дюйм) в течение 6 часов. Затем катализатор удалялся фильтрацией через целитовую прокладку и фильтрат испарялся при пониженном 7 9779 давлении с получением 3-0-(карбоксиметил)-2,5,6 триацетиласкорбиновой кислоты.(силикагель 3// 910,1, 0,2). Пример 1,3 - 5,6-0-изопропилиденаскорбиновая кислота Ацетилхлорид (0,67 мл) добавлялся в быстро перемешиваемую суспензию аскорбиновой кислоты(8,0 г) в ацетоне (80 мл) и смесь перемешивалась половину суток при комнатной температуре. Осадок собирался фильтрацией, промывался этилацетатом и высушивался при пониженном давлении с получением 8,29 г 5,6-0-изопропилиденаскорбиновой кислоты в виде бесцветного твердого вещества.(силикагель СН 3/МеОН/НОАС 310,1, 0,54). Пример 1,4 - 3-0-(этоксикарбонилпропил)-5,6 изопропилиденаскорбиновая кислота Раствор 5,6-изопропилиденаскорбиновой кислоты (2,0 г) в 10 млдобавлялся по каплям в суспензию(0,44 г 50 дисперсии минерального масла , промытой несколько раз гексаном) в 5 мл . После прекращения выделения газа раствор 1,43 мл этила 4-бромобутирата в 5 млдобавлялся по каплям и смесь перемешивалась при комнатной температуре половину суток. Растворитель испарялся при пониженном давлении и получившийся остаток хроматографировался на силикагеле (5,5 г) с использованием СН 3/МеОН (191) в качестве элюента. Соответствующие фракции отстаивались и расширители удалялись при пониженном давлении,давая вязкий осадок, содержащий 3-0(этоксикарбонилпропил)-5,6-изопропилиденаскорбиновую кислоту (1,1 г). Пример 1,5 - 3-0-(карбоксипропил)-5,6-изопропилиденаскорбиновая кислота 4,6 мл 2 добавлялось в раствор 3-0(этиоксикарбонилпропил)-5,6-изопропилиденаскорбиновой кислоты (1,02 г) в 15 мл . Спустя 1 час большая часть этанола была удалена при пониженном давлении и остаток разводился водой (10 мл) и подкислялся разбавленной Н (рН 3). Затем раствор насыщалсяи экстрагировался несколько раз этилацетатом осажденные экстракты затем высушивались с использованием 4. Растворитель испарялся при пониженном давлении с получением вязкого остатка, содержащего 3-0-(карбоксипропил)5,6-изопропилиденаскорбиновую кислоту (0,84 г). ТХ (силикагель СН 3/МеОН/НОАС 510,1,0,55). Пример 1,6 - 2. Раствор ди-трет.-бутил дикарбоната (0,36 г) в 10 млдобавлялся по каплям в раствор 2 ацетата (2 г,ВМ-23014) в 45 мл . Спустя 2 часа при комнатной температуре растворитель удалялся при пониженном давлении, давая остаток, который затем хроматографировался на силикагеле (150 г) с использованием СН 3/МеОН(91) в качестве элюэнта. Соответствующие фракции собирались и раствори 8 тели удалялись при пониженном давлении с получением остатка, содержащего 2 (1,45 г).(силикагель СН 3/МеОН 31, 0,52). Пример 1,7 0,2 мл диизопропилэтиламина добавлялось к раствору-а-цикло 2 (300 мг), 3-0-(карбоксипропил)5,6-изопропилиденаскорбиновой кислоты (56 мг) в 5 мл . Затем смесь перемешивалась при комнатной температуре половину суток, и растворитель удалялся при пониженном давлении. Остаток разделялся между смесью этилацетата/МеОН и насыщенным водным раствором , затем насыщенным водным аНСО 3 и высушивался 4. Растворитель испарялся при пониженном давлении, и остаток подвергался подготовительной ТСХ с использованием смеси СН 3/МеОН (81) в качестве элюента. Соответствующая УФ-положительная зона изолировалась и экстрагировалась с СН 3/МеОН. Растворители удалялись при пониженном давлении с получением вышеуказанного продукта (0,20 г). ТСХ (силикагель СН 3/МеОН 51, 0,54). Пример 1,8 - Удаление группы ВОС Производное аскорбиновой кислоты, содержащее(95 мг), показанное выше, обрабатывалось 25 в СНС 3 в течение 45 мин при комнатной температуре. Летучие вещества удалялись при пониженном давлении с получением ухого остатка, который очищался с использованиемС 18 НР и СН 3 СН/О, 1 водного . Конечный выход составлял 90 мг (- (/е) 1341). Пример 1,9 - Другие примеры осуществления Следующие производные соматостатина синтезировались аналогичным образом(-2)3(2)22. Пример 2,1 (-2)3(2)22 0,03 млдобавлялось к охлажденному во льду раствору 2(сукцинил)амино-2-(ацетоксиметил)-1,3-пропандиол-диацетата (83 мг) и(92 мг) в 2 мл . После перемешивания при 0-5 С в течение 30 минут добавлялся раствор. Смесь сначала перемешивалась при 0-5 С в течение 1 часа и затем перемешивалась при комнатной температуре половину суток. Растворитель удалялся при пониженном давлении, давая высушенный остаток, который разделялся между этилацетатом и водным насыщенным , и слойпромывался 5 водногои, наконец, водным насыщеннымзатем полученный раствор высушивался с использованием 4. Растворитель испарялся при пониженном давлении, оставляя остаток, содержащий (-2)3(2)2(0,14 мг). ТСХ(силикагель 2 3//41 0,1, 0,82). Пример 2,2 - Удаление группы ВОС 30 мг вышеуказанного соединения обрабатывалось 50 в СНС 3 45 минут при комнатной температуре затем летучие вещества удалялись при пониженном давлении, давая остаток. Следысовместно испарялись с этанолом несколько раз, и остаток титровался эфиром и затем высушивался с получением 30 мг продукта (30 мг). Х (силикагель СН 3/МеОН/НОАС 311, 0,24). Пример 2,3 - Другие примеры осуществления Следующие производные соматостатина синтезировались аналогичным образом.(-2)32 2. Пример 3,1 (-2)32 2,2 г прошедшего молекулярное сито (фильтр) в 3 А 3 (36 мг) добавлялись порционно с периодами 15 минут в раствор Ту - 2. (250 мг) и трис(ацетоксиметил)ацетальдегида (120 мг), полученный окислением триацетил-пента-эритриола дихроматом пиридиния или /оксалил хлорид/триэтиламин) в метаноле (10 мл), содержащем 10 уксусной кислоты. Затем смесь перемешивалась при комнатной температуре 30 минут и нагревалась 4 часа. После фильтрации остаток разделялся между этилацетатом и водой. Слой этилацетата промывался водой, затем водным аНСО 3 и потом высушивался 4. Растворитель испарялся при пониженном давлении с получением остатка (0,4 г), который затем растворялся в метаноле (5 мл), обрабатывался раствором / (рН 10), перемешивался в течение 1 часа и, наконец, нейтрализовался 1 до рН 5-6. После испарения растворителя остаток растворялся в 90 водном(5 мл) и перемешивался 30 минут. Летучие вещества удалялись при пониженном давлении, и следыи воды в получившемся остатке удалялись совместным испарением со спиртом (2 х). Остаток высушивался, затем титровался эфиром и, наконец, очищалсяс использованием условий, аналогичных описанным ранее,давая 41 мг (-2)3-22 в качестве бесцветного твердого вещества,(/) 1262,8. Пример 3,2 - Другие примеры осуществления Следующее производное соматостатина, называемое ВМ-23195, было синтезировано аналогичным образом. Пример 4,1 - 2-бромэтансульфонил хлорид 2-бромоэтансульфонат (4,0 г) обрабатывался 5 (11, 8 г) при охлаждении в ледяной ванне. После достижения жидкой фазы раствор нагревался при 90-120 С в течение 1,5 часов в масле, охлаж 9 9779 дался до комнатной температуры, выливался в 50 г раздробленного льда и затем перемешивался 15 мин. Смесь экстрагировалась СН 22 (3 х 30 мл) и комбинированные экстракты промывались 2 (2 х),5 аНСО 3 (2 х) и снова Н 2 О (2 х). Высушивание над безводным 4 и дистилляция при пониженном давлении давали 2-бромэтансульфонил хлорид в виде бесцветной жидкости (1,95 г, 42-44 С/ мм. рт. ст.). Пример 4,2 (2)2-2 Т(В)-Н-циклопропил-1-метил)-этил. Раствор 2-бромэтангсульфонилхлорида (30 мг) в(1 мл) добавлялся по каплям в раствор (ОС)СуТ(В)-(1-циклопропил-1-метил)-этила (150 мг) и(55 мг) в(2 мл) при 2 и 0 С. Реакционная смесь перемешивалась при 0-5 С 3 часа затем растворитель удалялся при пониженном давлении. Остаток растворялся в этилацетате и промывался 5 лимонной кислотой (2 х), 5 аНСО 3(2 х) и рапой (2 х). Затем раствор высушивался над безводным 4, фильтровался и упаривался досуха при пониженном давлении. Затем продукт очищался на короткой колонке силикагеля, элюированного этилацетатом. Фракции, содержащие продукт, собирались и растворитель удалялся при пониженном давлении, давая 105 мг -(2)2-2(1-циклопропил-1-метил)-этил в виде слегка желтого твердого тела (силикагель,СН 3/МеОН/НОАС (910,1), 0,36. Пример 4,3-(2)2-(2)2-2(11-) Раствор -(2)2-2(1-циклопропил-1-метил)-этила (100 мг) и 2-гидроксиэтилпиперазина (55 мг) в 2 мл 1-пропанола орошался при 22 в течение 2,5 часов. Затем раствор охлаждался до комнатной температуры, и растворитель удалялся при пониженном давлении. Затем остаток растворялся в этилацетате, содержащем 5 МеОН и промывался рапой (3 х). Наконец, раствор высушивался над безводным 4, фильтровался и упаривался досуха при пониженном давлении с получением 110 мг вышеуказанного твердого вещества. Без дальнейшей очистки это соединение использовалось непосредственно на следующем этапе. Пример 4,4 (2)2 110 мг защищенного производного соматостатина, полученного на предыдущем этапе, растворялось в 10 мл водного раствора 90 и перемешивалось при комнатной температуре при 2 в течение 1 часа.и Н 2 О удалялись при пониженном давлении, и остаток холодным эфиром (3 х 10 мл). Полу 10 чалось слегка желтоватое твердое вещество этот материал далее очищался на подготовительной обратной фазе , элюируясь 1) водным раствором 4 С и 2) водным раствором ОАС. Лиофилирование собранных фракций, содержащих вышеуказанный продукт, дало белое твердое вещество (18 мг - 1)/е) 1252,7 Пример 4,5- Другие примеры осуществления Следующие производные соматостатина синтезировались аналогичным образом-(2) 2- 23202 ПРИМЕР 5 - СИНТЕЗ ПРОИЗВОДНЫХ БОМБЕЗИНА Следующее производное бомбезина, также называемое ВМ-26333, синтезировалось способом, аналогичным описанному выше Другие производные пептидов, согласно этому изобретению, можно синтезировать аналогичным образом с использованием известных в технике синтетических модификаций. РЕЗУЛЬТАТЫ АНАЛИЗА ИСПЫТУЕМЫХ ПЕПТИДОВ ПРИМЕР 6 - АНАЛИЗ ОБРАЗОВАНИЯ СВЯЗЕЙ Для демонстрации связующего химического сродства аналогов соматостатинас рецептором соматостатина описанные выше очищенные соединения испытывались в анализах образования связей соматостатина, включающих измерения в пробирке торможения образования связей 125-11-14 с мембранами поджелудочной железы крыс 42. как показывает табл. 1, очищенные аналоги соматостатина, согласно этому изобретению, показали высокое связующее химическое сродство с этими рецепторами. Кроме того, молекулярный вес, определенный масс-спектрометрией и оцененный из молекулярной структуры, представлен в таблице для каждой производной соматостатина. Аналогичным образом, описанный выше очищенный аналог бомбезина испытывался в опыте на об 9779 разование связей бомбезином. Анализ образования связей состоял из измерений в пробирке торможения образования связей 125-Т 11 бомбезина с мембранами поджелудочной железы крыс 42 из анализа определилось, что связующее химическое сродство аналога бомбезина с рецепторомсоставляло около 21 нМ. ПРИМЕР 7 - АНАЛИЗ ТОРМОЖЕНИЯ ГОРМОНА РОСТАГруппы 5-ти самцов крыс(каждая имела вес 250-300 г) инъецировались в нормальных условиях производной соматостатина или физиологическим раствором. 30 минут до выбранных периодов времени после приема лекарств, показанных в табл.(2 часа, 4 часа, 6 часов, 8 часов) крысы анестизировались (50 мг/кг). Через 15 минут после анестезии кратное количество крови выбиралось проколом в области сердца над гепарином для измерения основного . Кроме того, производилась инъекция в нормальных условиях, который измерялся в плазме с использованием радиоиммуно-анализа, предоставленного . Процентное отношение торможениярассчитывалось из разности, полученной между значениями основного и стимулированного . В табл.показано воздействие различных очищенных аналогов соматостатина как функции времени. Действенность 2 (ВМ 23060) в торможении гормона роста у крыс сравнивается с действенностью других производных соматостатина (ВМ-23167, -23179, ВМ-23181) этого изобретения. Все производные показывают удивительную продленную длительность действия, которая уменьшается в зависимости от времени. Дополнительные эксперименты проводились на 2, аналоге соматостатина, и ВМ-23190, ВМ-23195 и ВМ-23197 для определения 50 (т.е. концентрации каждого соединения, требуемой для торможения высвобождения 50 гормона роста после определенного периода времени) соответствующего соединения. Эксперименты проводились в диапазоне доз от 25 мкг/кг до 0,25 мкг/кг. В табл.показано удивительное улучшение действия производных соматостатина по сравнению с немодифицируемым пептидом на разных временных интервалах, что показывает зависимое от времени торможение стимулированного высвобождениясоединениями этого изобретения. ПРИМЕР 8 - АНАЛИЗ АКТИВНОСТИ ПРОТИВ РАЗМНОЖЕНИЯ Два описанных выше очищенных аналога соматостатина также испытывались на активность против быстро размножающихся клеток. В табл.показано воздействие этих пептидов на рост опухолевых клеток поджелудочной железы крысы 42. В отличие от природного соматостатина, производные этого изобретения показывают значительную актив ность против размножения. Как видно из фиг. 1, как ВМ-23014 С (аналог соматостатина), так и ВМ 23118 (производная ВМ-23014) тормозят рост клеток опухоли поджелудочной железы крыс 42 в зависимости от концентрации, причем ВМ-23118 является более эффективным из двух соединений. Оба соединения тормозят рост опухолевых клеток в большей степени, чем немодифицированные аналоги соматостатина при эквивалентных концентрациях. ПРИМЕР 9 - АНАЛИЗ ПОГЛОЩЕНИЯ ТИМИДИНА В этом опыте культуры привоя швейцарских клеток ЗТЗ выращиваются в модифицированной орлиной среде Далбекко (- ) и дополняются 10 сывороткой утробного плода теленка в увлажненной атмосфере 102 и 90 воздуха при 37 С. Затем клетки засеивались в групповые лотки с 24 отстойниками и использовались 4 дня после последней смены Среды. Чтобы задержать клетки в фазе / клеточного цикла, использовалась свободная от сывороткиза 24 часа до анализа поглощения тимидина затем клетки дважды промывались 1 мл кратным(-сыворотка, 0,5 мкМ) иметил-эн тимидином 20 /ммоль,). Производные бомбезина вначале испытывались при 0,001,0,01, 0,1, 1, 10, 100, 100 нМ. Спустя 28 часов при 37 С анализировалось включение метил-эн тимидина в нерастворимых в кислоте отстойниках следующим образом. Сначала клетки промывались дважды ледяным 0,9(кратные 1 мл) затем растворимая в кислоте радиоактивность удалялась выдержкой в термостате в течение 30 минут при 40 С с 5 трихлоруксусной кислотой (ТСА). Затем культуры промывались один раз (1 мл) 95 -этанолом и делались растворимыми 30-минутной выдержкой в термостате с 1 мл 0,1 . Ставший растворимым материал переносился к пузырькам, содержащим 10 мл, и радиоактивно определялся жидкой сцинтилляционной спектрометрией. Этот анализ показал способность производных бомбезина стимулировать поглощение тимидина клетками. ЕС 50 рассчитывалось и составляло 0,48 нм, что показывало,что производные бомбезина этого изобретения являются сильными стимуляторами поглощения тимидина. Методы использования Производные пептидов, согласно этому изобретению, могут приниматься млекопитающим, особенно человеком, одним из традиционных способов(например, через рот, парентерно, через кожу или через слизистую) в составе с поддерживаемым высвобождением с использованием био-деградирующего, био-совместимого полимера или введением на месте (например, в случае производных противоракового бомбезина или соматостатина, в легкие) с использованием мицелл, гелей и липосом. Дозы обычно те же самые, что и используемые сейчас в случае терапевтических пептидов для людей. 11 9779 Кроме того, производные пептидов этого изобретения пригодны для улучшенного лечения заболеваний, поддающихся лечению соответствующим немодифицированным пептидом. В частности, описанные выше производные соматостатина пригодны для лечения рака, акромегалии, панкреатита, вызванного травмой размножения, диабета, диабетической ретинопатии, следующей за рестенозом ангиопластии, СПИДа, нейрогенного воспаления, артерита и гастрокишечных проблем, включая диаррею. ТаблицаСвязующее химическое сродство и молекулярные веса производных соматостатина пептида, замеренные в пробирке Мол. вес испыт. Мол. вес расчет С 50 нМ ТаблицаТорможение стимулированного высвобождения гормона роста у крыс производными пептида соматостатина Торможение (контрольный процентиль) 25 мкг/ кг 2 часа 4 часа 6 часов 8 часов ВМ-23060 86,39 64,96 47,62 38,15 ВМ-23167 92,67 79,54 59,72 50,14 ВМ-23179 92,79 63,85 67,78 68,26 ВМ-23181 99,24 77,07 60,56 56,12 ТаблицаТорможение стимулированного высвобождения гормона роста у крыс производными пептида соматостатина,принятого при нормальных температуре и давлении 50 (мкг/кг) 2 часа 4 часа 6 часов 8 часов ВМ-23023 0,48 1,11 2,26 4,32 ВМ-23190 0,68 0,57 0,76 1,04 ВМ-23195 1,19 3,13 2,08 3,23 ВМ-23197 1,01 0,59 1,14 1,59 9779 ТаблицаАктивность производных пептида соматостатина против размножения Рост клеток (процент контроля) 1-23197 66,4 1 Концентрация 100 нМ, опухолевые клетки поджелудочной железы крысы 42 спустя 8 дней. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Производное пептида, содержащее остаток соматостатина или бомбезина, или их производного,фрагмента или аналога, и заместитель, выбранный из группы, состоящей из соединений ,или ,где соединение- это 1 где о- это О, каждое 1 и 2, - независимо, - это Н,(2)6 2(7)28, где 6 это Н и каждое 7 и 8, независимо, это Н- это целое число между 1 и 5, включительно, и одно из 3 или 4 это (2)12, где 12 - это СО, и- это целое число между 1 и 5 включительно, и остающиеся 3 или 4 - это Н, (1-С 6) гидроксиалкил, соединениеэто 132 14 2(2 )-16-17 -(2 )-18 152 где каждое 13, 14, 15 независимо, - это Н или (2-4) ацил,16 - этоили отсутствует,17 - это СО или отсутствует,18 - это СО, 2 или отсутствует, - это целое число между 0 и 5 включительно, и- это целое число между 0 и 5 включительно, и соединение- это 19 - это Н, ОН, (1-С 6) гидроксиалкил,20 - это О или отсутствует,21 - это (С 1-С 6)алкил или отсутствует,22 - этоили СН,23 - отсутствует,24 - это , , ,25 - отсутствует,26 - СН 2, 2 или отсутствует, - это целое число между 0 и 5 включительно, - это целое число между 0 и 5 включительно,р - это целое число между 0 и 5 включительно, и- это целое число между 0 и 5 включительно,при этом остаток соматостатина или бомбезина, или их производного, фрагмента или аналога, присоединен к каждому из заместителей связью -, 2 между заместителем и атомом азота- окончания или боковой цепочки пептидного остатка. 2. Производное пептида по п. 1, отличающееся тем, что заместитель - это соединение . 3. Производное пептида по п. 1, отличающееся тем, что заместитель - это соединение . 4. Производное пептида по п. 3, отличающееся тем, что 18 - это 2. 5. Производное пептида по п. 4, отличающееся тем, что 13, 14, 15 - это Н,17 - отсутствует. 6. Производное пептида по п. 5, отличающееся тем, что заместитель - это (2)3(2)2-2 или (НОСН 2)3 С-СН 2. 7. Производное пептида по п. 1, отличающееся тем, что заместитель - это соединение . 8. Производное пептида по п. 7, отличающееся тем, что 24 - это С. 9. Производное пептида по п. 7, отличающееся тем, что, как минимум, одно из 22 и 24 - это . 10. Производное пептида по п. 9, отличающееся тем, что оба 22 и 24 - это . 11. Производное пептида по п. 10, где заместитель - это-(2 )215 Производное пептида по п. 1, отличающееся тем, что это-2 - 12. Производное пептида по п. 10, отличающееся тем, что содержит остаток соматостатина или его производного, фрагмента или аналога. 13. Производное пептида по п. 12, отличающееся тем, что аналог соматостатина это одно из 2. 14. Производное пептида по п. 11, отличающееся тем, что содержит остаток бомбезина или его производного, фрагмента или аналога. 16. Способ лечения рака у пациента, включающий в себя принятие пациентом терапевтического количества производного пептида, отличающийся тем, что в качестве производного пептида используют соединение по п. 1. 17. Способ по п. 16, отличающийся тем, что производным пептида является производное соматостатина или его аналога.