Способ получения биологического инсектицидного препарата для борьбы с личинками кровососущих комаров

(51) 61 35/74 (2006.01) 01 63/00 (2006.01) 01 7/04 (2006.01) МИНИСТЕРСТВО ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ лихорадки, туляремии, филяриотоза, различных вирусных инфекций, выступая обычно в качестве одного из хозяев того или иного возбудителя. Одним из путей борьбы с кровососущими комарами,оказалось применение экологически чистых биологических препаратов на основе бактерий для снижения риска заболевания человека и животных. Сущность изобретения штамм бактерии(тип 14) выращивают в условиях высокоплотного культивирования на питательной среде с дополнительной дробной подпиткой, содержащий глюкозу и минеральные соли. Полученную таким образом культуральную жидкость концентрируют методом центрифугирования. Полученный бактериальный препарат Биокомарин,паста обладает высокой инсектицидной активностью по отношению к личинкам комаров разных видов.(72) Раманкулов Ерлан Мирхайдарович Балпанов Дархан Серикович Тен Олег Андреевич Тспбаев Наурызбек Ержанлы(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОГО ИНСЕКТИЦИДНОГО ПРЕПАРАТА ДЛЯ БОРЬБЫ С ЛИЧИНКАМИ КРОВОСОСУЩИХ КОМАРОВ(57) Кровососущие комары являются переносчиками многих болезней - малярии, желтой Изобретение относится к биотехнологии. Способ высокоплотного культивирования бактерий(серотип 14) включает культивирование этих бактерий на питательной среде с дополнительной подпиткой, содержащей глюкозу,минеральные соли и воду. Культивирование проводят при температуре 28-30 С и рН среды 7,4-7,5 с аэрацией в течение 2-3 суток. Изобретение позволяет упростить состав питательной среды, сократить продолжительность культивирования бактерий, повысить выход белка- эндотоксина, снизить стоимость среды для культивирования бактерий. Многие комары совершенно безобидны, но существуют и такие, которые являются носителями различных вирусов и болезней. Самая страшная из них - малярия, ежегодно ей заболевают сотни миллионов человек, а подвергаются риску заражения 2.5 миллиарда.(серотип 14) в процессе жизнедеятельности синтезирует дельта-эндотоксин в виде кристалла овальной формы. Дельта-эндотоксин является действующим токсическим веществом. Абсолютно безвреден для человека и животных, действует избирательно на кровососущих двукрылых - комаров, мошек. Известен биопрепарат,состоящий из спорокристаллического комплекса (Патент 2111667 Биоларвицид для борьбы с личинками комаров и способ его получения). Недостатком этого препарата является, то, что вещества входящие в состав питательной среды (соевая мука,солодовый экстракт, кукрузный крахмал) трудно стандартизируемые, дорогие и дефицитные, что затрудняет широкомасштабное производство препарата. Задачей заявляемого изобретения является разработка способа культивирования микроорганизмов, обладающего более сильными ларвицидными свойствами с использованием в составе питательной среды доступных и экологически чистых веществ. Указанная задача решается за счет- использование в качестве основы препарата кристалл - образующего штамма(серотип 14), обладающего выраженными ларвицидными свойствами против комаров культивирование штамма на оптимизированных питательных средах и дополнительной подпиткой на основе глюкозы и минеральных солей, обеспечивающего высокий выход кристаллов белка- эндотоксина Суть предлагаемого изобретения иллюстрируется следующими примерами. Пример 1. Питательную среду подбирали с высоким содержанием углерода,которое оказывает существенное влияние на продукцию бактериями целевого продукта(кристаллов белка- эндотоксина) для максимального накопления ларвицидной активности культуры(серотип 14). Состав посевной питательной среды , для культивирования производственного штамма(серотип 14).- вода водопроводная до 1007,4-7,5. Культивирование посевного материала проводилось на качалках при температуре 28 С,скорость вращения 220 об/мин. Продолжительность культивирования 48 часов. Пример 2. Проведен засев ферментера на 7 л. Состав ферментационной среды глюкоза - 13,125 г/л,2 НР 4 - 0,585 г/л, (4)24 - 0,355 г/л,4 - 0,4125, СаС 2 - 0,03 г/л. С 21 часа роста началась подпитка. Состав подпиточной среды глюкоза - 495,58 г/л, 2 НР 4 - 10,145 г/л,(4)24 - 14,85 г/л, 4 - 3,19 г/л,СаС 2 - 1,32 г/л. Установленная скорость подпитки 80 мл/ч. Одновременно с подпиткой культуры началось рН-статирование. Показатели процесса представлены в таблице 1. На 35 ч роста скорость подпитки уменьшили до 40 мл/ч в связи с накоплением редуцирующих веществ в культуральной жидкости. Затем подпитка культуры велась дробно с 35 часов роста через 1 час до 48 часов роста. Таблица 1 Характеристика процесса культивирования Часы роста 0 9 21 26 28 31 34 37 40 43 48 2 Биосинтез инсектицидного штамма в ферментере проходит 44-48 часов при том же режиме высокоплотного культивирования до полного высыпания спор и кристаллов. Исходя из данных,представленных в таблице, можно сделать вывод,что продуктивность культуры в питательной среде на основе глюкозы в отличие, от питательной среды биопрепарата Биоларвицид,паста(Инновационный патент 28675 б на основе соевой муки, солодового экстракта, кукрузного крахмала) по содержанию белка - эндотоксина увеличилась на 30. Увеличение выхода белка - эндотоксина связано с тем что, в процессе культивирования использовали подпиточную среду. Проведенный анализ показывает,что предложенный способ получения эндотоксина позволяет повысить производительность ферментеров при проведении процесса биосинтеза эндотоксина и снизить удельный расход воды на приготовление ферментационной среды. Культуральную жидкость передали на стадию концентрирования. Концентрирование проводили на центрифуге. Пасту после центрифугирования передали на распылительную сушку. Перед сушкой в пасту добавили 5 натрия хлористого. Пример 3. Целевая эффективность биологического инсектицидного средства Биокомарин была проверена 4 августа 2014 г. в полузатопленных подвалах двух многоэтажных домов Турксибского района г. Алматы площадью 200 и 350 кв.м. Непосредственно перед экспериментом, имаго подвальных комаров -. были уничтожены путем обработки мест их посадки(стены) из опрыскивателя 0,05 рабочим раствором дельтаметрина. После проветривания поверхность воды в подвалах была обработана с помощью опрыскивателя Биокомарином 3,0 водной суспензией по инструкции для сильно загрязненных органическими веществами водомов. Последующие трехкратные наблюдения(через 5, 10 и 20 дней) подтвердили эффективность препарата - выплод комаров в обоих подвалах полностью прекратился. Опыты по проверке биологической активности проводились в РГП Казахский Научный Центр Карантинных и Зоонозных Инфекций имени Масгута Айкимбаева г. Алматы. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ Способ получения биологического инсектицидного препарата для борьбы с личинками кровососущих комаров путем высокоплотного культивирования, отличающийся тем, что при культивировании в состав питательной среды включают дробную подпитку с содержанием глюкозы и минеральных солей, а для синтеза активного начала используют культуру(тип 14).