Способ отделения и определения вирусной нагрузки в образце панкреатина

(51) 12 9/94 (2009.01) 12 1/04 (2009.01) 12 1/24 (2009.01) КОМИТЕТ ПО ПРАВАМ ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ МИНИСТЕРСТВА ЮСТИЦИИ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(74) Тагбергенова Модангуль Маруповна Тагбергенова Алма Таишевна Касабекова Найля Ертисовна(54) СПОСОБ ОТДЕЛЕНИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИРУСНОЙ НАГРУЗКИ В ОБРАЗЦЕ ПАНКРЕАТИНА(57) В заявке описаны способы отделения вирусной нагрузки от образца панкреатина и количественного определения вирусной нагрузки в образце панкреатина с высокой чувствительностью.(73) Абботт Продактс ГмбХ ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Способ отделения вирусной нагрузки от образца панкреатина,отличающийся тем,что осуществляют следующие стадии, на которых а) приготавливают жидкий опытный образец панкреатина, пригодный для центрифугирования, из образца панкреатина, не изменяя его вирусной нагрузки б) подвергают по меньшей мере одну определенную часть опытного образца панкреатина,полученного на стадии а) способа, по меньшей мере одному низкоскоростному центрифугированию в условиях, в которых вирусы, характеризующиеся константами седиментации 120 , не образуют дебрис в) отбрасывают все твердые отложения, которые необязательно образуются на стадии б) способа во время низкоскоростного центрифугирования, и сохраняют супернатант опытного образца панкреатина г) подвергают по меньшей мере одну определенную часть супернатанта опытного образца панкреатина, полученного на стадии в) способа,первому ультрацентрифугированию в среде со ступенчатым градиентом, где продолжительность первого ультрацентрифугирования и относительную центробежную силу для первого центрифугирования выбирают таким образом,чтобы вирусная нагрузка количественно транспортировалась из супернатанта опытного образца панкреатина в первую целевую фракцию,находящуюся выше пограничного слоя или в пограничном слое между расположенным сверху компонентом градиента с наименьшей концентрацией и расположенным снизу компонентом градиента со следующей более высокой концентрацией, и количественно выделяют 30 первую целевую фракцию,необязательно включающую любой дебрис, присутствующий после центрифугирования, которая содержит вирусную нагрузку, из супернатанта опытного образца панкреатина д) подвергают первую целевую фракцию,полученную на стадии г) способа, второму ультрацентрифугированию,где второе ультрацентрифугирование осуществляют при относительной центробежной силе, превышающей относительную центробежную силу при первом ультрацентрифугировании, в градиентной среде того же типа, который используют для первого ультрацентрифугирования, где градиентная среда представляет собой градиентную среду с более высокой концентрацией по сравнению с концентрацией компонента градиента с наименьшей концентрацией в первой целевой фракции, и е) получают вторую целевую фракцию,содержащую вирусную нагрузку, в результате отбрасывания верхних 75 об. или более жидкости верхнего слоя, соответствующего первой целевой фракции,и получают нижнюю фракцию,соответствующую нижним 25 об. или менее жидкости верхнего слоя, и полный слой градиентной среды с более высокой концентрацией за исключением любого дебриса, который необязательно присутствует после центрифугирования. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что после осуществления стадии ) способа дополнительно осуществляют стадию ж) способа, на которой количественно определяют вирусную нагрузку в образце панкреатина путем определения титра вирусной инфекции во второй целевой фракции,содержащей вирусную нагрузку. 3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что перед осуществлением количественного определения