Применение 4′ – йод – 4′ – деоксидоксорубицина для лечения амилоидоза, способ лечения амилоидоза

(51)66131/704 НАЦИОНАЛЬНОЕ ПАТЕНТНОЕ ВЕДОМСТВО РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН(73) Поликлинико Сан Маттео, Иституто Ди Риковеро Э Кура А Караттере Шиентифико Ди Диритто Публико , Иституто Национале Пер Ло Студио Э Ла Кура Деи Тумори(56) Малая медицинская энциклопедия. М. Советская медицина, 1991, т. 1, с. 83-844438105, 20.03.844037693 А 1, 06.06.91 ЕР 0275966 А 1, 27.07.88 ЕР 00502661 А 2, 09.09.92 ЕР 0464206 А 1, 08.01.92 ПРИМЕНЕНИЕ 4-ЙОД-4-ДЕОКСИ(54) ДОКСОРУБИЦИНА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ АМИЛОИДОЗА, СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ АМИЛОИДОЗА(57) Описывается использование 4-йод-4-деоксидоксорубицина и его фармацевтически приемлемых солей для лечения амилоидоза. 9771 Данное изобретение относится к новому применению известного антрациклина с противоопухолевой активностью. Более конкретно - изобретение относится к новому применению 4-йод-4-деоксидоксорубицина и его фармацевтически приемлемых солей при лечении амилоидоза. 4-йод-4-деоксидоксорубицинформулы описан в патенте США 4 438 105 и др. вместе со способом его получения. Указанный антрациклин, который отличается от доксорубицина тем, что гидроксил сахара замещен в положении 4 одним атомом йода, обладает высокой противоопухолевой активностью. Термин амилоидоз относится к различным болезненным состояниям, обладающим в качестве общей характерной черты тенденцией определенных белков к полимеризации и осаждению во внеклеточном пространстве в виде нерастворимых фибрилл,вызывая структурные и функциональные повреждения органов и тканей. Хотя они содержат огромное разнообразие белковых субъединиц, тем не менее различные типы амилоидов имеют одинаковое ультраструктурное строение в виде переплетающихся -пластов. Фибриллы образуются из отдельных легких цепей моноклональных иммуноглобулинов многочисленных других амилоидогенных белков, таких, как протеин АА, транстиретин, -2-микроглобулин, бета-протеин, которые вызывают амилоидоз. Итак, неожиданно было установлено, чтои, в частности, его гидрохлорид является активным в том смысле, что он вызывает разложение амилоидных фибрилл. Взаимодействие лекарственный препарат/фибрилла является основой успешного клинического результата, наблюдаемого у пациентов, больных амилоидозом. В связи с тем, что известна структура их в виде -пластов, общая для всех видов амилоидоза, 4-йод-4-деоксидоксорубицин представляется перспективным для лечения всех видов амилоидоза. Экспериментальные данные, относящиеся к соединениюс амилоидными фибриллами различных биохимических композиций Предварительно определенное количество амилоидных фибрилл (1 мг/мл) термостатировалось с различными концентрациями гидрохлорида . Инкубирование осуществлялось в физиологическом растворе в течение 2 часов, при этом система подвергалась постоянному спокойному перемешиванию. Затем фибриллы центрифугировались при 5000 об/мин и проводилось определение оптической плотности всплывшей части при 478 нм. Процедура промывания повторялась три раза. После окончательного этапа центрифугирования осуществлялся количественный и качественный анализ связи с фибриллами с использованием таблетирования. Качественный анализ Таблетка суспендировалась в фосфатном буферном растворе (ФБР) и затем термостатировалась в течение ночи с ферментом протеазы. Такая обработка вызывает полный гидролиз белков. Количество связанного фибриллами Х может быть измерено в всплывшем слое жидкости спектрофотометрированием при 478 нм. Испытания показали связывание 41 мгна 1 мг фибрилл. Приведенные данные были получены при исследовании амилоидных фибрилл двух пациентов( и СА), страдающих амилоидозом. Качественный анализ Качественный анализ, проведенный с использованием иммунофлюоресцентного микроскопа, был осуществлен с применением спектрофлюориметрических свойств . Был определен состав из следующих фибрилл легкие иммуноглобулиновые цепочкиамилоид А (АА) 2-микроглобулин-протеин (АВ) транстиретин (Вар.30) . Фибриллы инкубировались с 10-7 и св 0,15 М растворев течение 1 часа и экстенсивно промывались 0,15 М раствором . Характерная антрациклиновая флуоресценция оценивалась возбуждением при 484 нм и отсчетом при 610 нм. Все фибриллы, инкубированные с , показали интенсивную флуоресценцию, в то время, как соответствующие фибриллы, термостатированные с, не обнаружили заметной флуоресценции. Ингибирование образования инсулиновой фибриллы 10 мг коммерческого бычьего инсулина, суспендированного в 1 мл (1.74 х 10-3 М) 5 уксусной кислоты, инкубировались в течение двух часов при 85 С до образования прозрачного геля. После замораживания при -80 С, нагревания до 37 С и повторения этой процедуры 5 раз фибриллы подвергались центрифугированию в микроцентрифуге. 9771 Производилось добавлениеив различных молярных отношениях к фибриллярному белковому предшествующему соединению (инсулину)., а не , полностью ингибировал образование амилоидных фибрилл при молярных соотношениях 11 и 12 и частично при молярном соотношении 14. Испытания показывают, чтоингибирует фибриллогенез. Экстракция гликоламиногликановиз амилоидных фибрилл и оценка их связывания применениемвыделялись из амилоидных фибрилл с применением ионообменной хроматографии в присутствии 6 М мочевины. Метод осуществлялся с использованием жидкостной хроматографии быстрого разрешения с колонкой. Фибриллы растворялись в 50 мМ фосфатного буфера с рН 5,0, содержащего 6 М мочевины и 0,2. Выделение производилось при 0-5 молярном градиенте . При использовании этого метода белковые фибрилльные компоненты выделялись из гликозаминогликанов (дерматан и гепаран сульфат) без какой-либо необратимой денатурации. Выделенный белковый компонент подтверждает высокое сродство для , наблюдаемое в природных фибриллах. Результаты этих испытаний показывают, что гликозаминогликаны, хотя и являются наиболее распространенными компонентами амилоидных фибрилл, не являются необходимыми для связывания с . На основе полученных результатов можно сделать заключение, чтои его фармацевтически приемлемые соли могут успешно использоваться для лечения пациентов, страдающих от амилоидоза. Прием осуществляется парентерально в виде соответствующих инъецируемых водных растворов. Названные растворы могут быть получены с применением стандартного метода в присутствии обычных носителей и/или разбавителей (см., например, публикацию .и др. Активность и токсичность 4-йод-4-деоксидоксорубицина у пациентов с прогрессирующим раком грудной железы 2719-725, 1991). Дозы могут варьироваться от 5 до 150 мг/м 2 площади тела в неделю при внутривенном введении. Предпочтительными вариантами дозировок являются от 15 мг/м 2 до 30 мг/м 2 площади тела в неделю при внутривенном введении в течение двух-четырех недель. Ниже даются основные клинические данные,касающиеся 5 пациентов. ПАЦИЕНТ 1 Этот случай относится к пациенту мужского пола 45 лет, страдающему множественной миеломойи амилоидозомс широко распространенным кожным и мышечным разложением. В июле 1991 г. он перенес аутогенную пересадку костного мозга. Ему была назначена внутривенная дозировкав 190 мг в течение 4 часов. Уже на следующее утро у пациента наблюдалось значительное улучшение кожи и подвижности конечностей. В течение следующих дней наблюдалось большое количество выделяемых с мочой амилоидозных белковых фрагментов наряду со значительным снижением амилоидных отложений в коже и отложений на уровне межжелудочковой сердечной перегородки (с 13 до 10 мм). Ячеистое улучшение в подвижности конечностей и в амилоидных отложениях сохранялись в течение следующих шести месяцев без дальнейшего лечения. ПАЦИЕНТ 2 Этот случай касается пациента мужского пола 57 лет, страдающего от амилоидоза с обширным поражением желудочнокишечного тракта (8-10 диарейных опорожнений в день), подвергшемуся значительной потере веса в 15 кг за шесть месяцев (вес 64 кг) и с признаками нефротического симптомокомплекса (протеинурия 7 г/день). Он подвергался лечению шестью циклами мельфалана и преднизона, закончившемуся в январе 1991 г. без какого-либо результата. В феврале 1992 г. его пролечили двумя дозами (80 и 100 мг/м 2). Непосредственно после лечения наблюдались ячеичное ухудшение диареи, частично регулируемое соматостатином (зарегистрированный товарный знак), и протеинурии (41 г/день), однако в течение последующих месяцев состояние внутренних органов брюшной полости постепенно улучшалось с ячеистым снижением в кишечных опорожнениях (3-4 раза/день). Пациент вновь восстановил вес (68 кг) и протеинурия восстановилась приблизительно до 4 г/день. Общее состояние пациента значительно улучшилось до такой степени, что он имел возможность вернуться к работе. ПАЦИЕНТ 3 Этот случай откосится к пациенту женского поля , страдающему от амилоидоза ,главным образом, почечного расположения (нефротический симптомокомплекс с протеинурией (7 г/день и с селезеночным расположением, диагносцированным в 1991 г. С декабря 1991 г. по май 1992 г. пациент подвергался лечению алкилирующими агентами без какого-либо улучшения. В июне пациенту было сделано сцинтиграфическое исследование на амилоидные отложения с применением 131-, которое подтвердило их почечное и селезеночное расположение. В июле 1992 г. пациент подвергся лечениюпри внутривенной дозе 30 мг/м 2 в неделю в те 3 чение двух недель и 15 и 20 мг/м в последующие два приема. После первоначального повышения протеинурия снизилась до 6 г/день, и эта величина сохранялась в течение последующих шести месяцев. ПАЦИЕНТ 4 Этот случай относится к пациенту мужского полав возрасте 70 лет, страдающему плазмацитомой и амилоидозом( ). Диагноз был поставлен в июле 1991 г., когда пациент начал жаловаться на интенсивную боль в крестцовой области, распространяющуюся на левую нижнюю конечность, такую, что создавалась трудность при хождении. Инструментальное исследование показало присутствие твердой массы диаметром около 10 см, определяющей разрушение одной стороны крестца и левой подвздошной области, обладающей распространяющимся действием в тазовой полости, проникающей в позвоночный канал и пропитывающей ягодичные мышцы. Исследование биопсии показало наличие амилоидомы. Между октябрем 1991 и январем 1992 г. пациент подвергался лечению кобальтом в количестве 75 сеансов с общим облучением 50 Грей, а в марте 1992 г. был начат цикл химиотерапевтического лечения циклофосфамидом по 500 мг/день в течение 5 дней в месяц с общим количеством в 6 циклов,однако без какого-нибудь радиографически очевидного снижения размера амилоидомы или уменьшения болевой симптоматологии. В ноябре 1992 г. было проведено сцинтиграфическое исследование амилоидных отложений с применением 131-, которое подтвердило нахождение радиоизотопа в крестцовом отделе. Затем пациент был подвергнут лечению с использованиемпри внутривенной дозировке 30 мг/м 2 в течение двух недель и 20 мг/м 2 в течение следующих двух недель, что привело к почти немедленному снижению в болевой симптоматологии, так,что это побудило его к отказу от приема анальгетиков. Ультразвуковое диагностическое исследование,проведенное в январе 1993 г., показало снижение массы ягодичного инфильтрата (с 12 см до 5 см), в то время как магнитный резонанс тазовой области показал снижение диаметра амилоидомы приблизительно с 10 см до 8 см. Улучшение в болевой симптоматологии сохранялось в течение 14 месяцев после лечения . Сцинтиграфическое исследование амилоидных отложений, проведенное с использованием 131 через месяц после леченияи спустя 14 месяцев после него показало постепенное, но полное рассасывание амилоидных отложений. ПАЦИЕНТ 5 Этот случай относится к пациенту мужского поляв возрасте 48 лет, страдающему амилоидозом, размешенным в основном в почечной и селезеночной области. Нарушения начались в сентябре 1992 г. с появления опускающихся отеков. Биологическое исследование анализа тканевой жидкости показало присутствие большой протеинурии(12,6 г/день), дислипемии и электрофоретические серопротеиновые симптомы, совместимые с нефротическим синдромом. В течение сентября пациент подвергся исследованию с применением ультразвуковой почечной биопсии, которая показала присутствие амилоидных скоплений на уровне клубочковых и интерстициальных сосудов. Было начато лечение кортикостероидными препаратами, но вскоре оно было прервано из-за неэффективности. В январе 1993 г. пациент подвергся сцинтиграфическому обследованию на амилоидные отложения с применением 131-,которое выявило значительное скопление радиоизотопа на селезеночном и почечном уровнях. В течение февраля пациент подвергся лечениюпосредством внутривенных вливаний при дозировке в 30 мг/м 2 при общем назначении 4-х приемов. К марту 1993 г. спускающиеся отеки явно уменьшились, измерения ежедневной протеинурии составили приблизительно 6 г/день, а ультразвуковой контроль показал, что размеры селезенки снизились с 12,3 см (продольный диаметр) до 11,3 см. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Применение 4-йод-4-деоксидоксорубицина и его фармацевтически приемлемых солей в качестве средства для лечения амилоидоза. 2. Способ лечения амилоидоза, отличающийся тем, что он включает введение пациенту терапевтически эффективного количества 4-йод-4-деоксидоксорубицина или его фармацевтически приемлемых солей. 3. Способ лечения по п.2, отличающийся тем,что 4-йод-4-деоксидоксорубицин вводят пациенту внутривенно при еженедельной дозировке, варьирующейся от 15 мг/м 2 до 30 мг/м 2 площади тела в виде раствора, приготовленного стандартным способом, содержащего фармацевтически приемлемые носители или разбавители в течение периода времени в интервале от 2 до 4 недель. Верстка Казпатент, исполнитель Л.Н. Анищенко Ответственный за выпуск Э.З. Фаизова Корректор А.Б. Вышкварко