Способ определения Т-лимфоцитов с Fc- гамма-рецепторами

Известен способ определения Т лимфоцитов с Рсжрецепторами. основанный на смешанном розеткообрдвовании общей взвеси лимфоцитов с нативными сенсибилизировамными 196 антителами, эритроцитами быка и меченными эритроцитами барана. Иетку чаще всего осуществляют флуоресцеином (что требует использования люминисцентного микроскопа, но возможна окраска эритроцитов обычным красителем. например генцианви олетом /1/.Недостатки способа Необходимость использования двух зритроци тарных реагентов необходимость предцарительной метки одного из реви гентоеТехнический результат заключающийся в упрощение способа опреде ленив Т лимфоцитов с РсХрецепторами обеспечивается тем, что в спое собе определения Т лимфоцитов с РсХрецепторами пключающем реакции розеткообразоаания лимфоцитов с эритроцитами быка, сенсибилизированными 196 антителами в субагглютинирующеи дозе с последующим учетом результатов, согласно изобретению используют предварительно Фиксированные ацетальдегидом эритроциты быка, сенсибилизировнные 190.Отличительными признаками являются приготовление реагента на фиксированных (вместо нативнын) эритроцитах быка и использование е розеткообразоцании для выделения Т лимфоцитов с Рсхрецепторами тольт ко одного реагента.Способ осуществляют следующим образом. Смешивают равные объемы взвеси (2 х 10 6 клеток/мл) лимфоцитов, выделенных в градиенте фит коллеерограФин и взцеси (12 х 10 В клеток/мл), предварительно Фиксированных эритроцитов быка, сенсибилизированных 196 антителами ки инкубируют БО мин. при Ч о С. Розеткообразование останавливают и розетки стабилизируют добавлением к смеси 1/8 объема 3 раствора глутарового альдегида. Осадок осторожно ресуспендируют из суспензии готовят мазок. который Фиксируют ЭВ о этанолом и окрашивают 0,1 И раствором метиленового синего в течение 1-2 мин. Под иммерсионным микроскопом подсчитывают процентное содержание лимфоцитов. связавших не менее трех эритроцитов. это и есть показатель содержания Т лимоо цитое с Рс Х рецепторами.По способу прототипа смешивают 0,1 мл взееси лимфомононуклеарое(2 х 10 В клеток/мл), выделенных в градиенте Фиколлоерографин. и 0,1 мл взвеси, содержащей в 1 мл 1,2 х 10 8 окрашенных генцианвиолес том эритроцитов барана, и 1.2 х 10 8, сенсибилизированных К 96 антит телами ( в субагглютинирующеи дозе), натиеных эритроцитов быка. Смесь последовательно подвергают следующей обработкеВысушенный мазок Фиксируют 96 о этанолом при комнатной температуре, окрашивают 0.1 и раствором метиленового синего в течение 1-2 мин. Под иммерсионным микроскопом подсчитывают в 7 сотник лимфоцитовПОРОЗНЬ КОЛИЧЕСТДО КЛЕТОК, СВЯЗВВШИК ТОЛЬКО ЗРИТРОЦИТЫ бдРЙНЭ НЕменее трех) И Т лимфоциты без РсХрецепторов только сенсибилизиро ванные эритроциты быка (не менее трех) не Т лимфоциты с РсХрецвптороми и одновременно оба зритроцитарных реагента (не менее трех каждого) т Т лимфоциты с Рскрецепторами. Подсчет 7 сотен лимфоцитов порознь о каждой исследуемой взвеси лимоомононуклевров дает оозможм ность не только оценить достоверность относительного содержания соответствующих типов роэеткообразующих клеток, но и статистически для каждого обследуемого сравнить два метода прототипа и предлагаемый.По предлагаемому способу. 0.1 мл взвеси лимфомононуклеаров (2 х 10 В клеток/мл), выделенных в градиенте ФиколлоерограФин смешивают с 0,1 мл взвеси, содержащей в 1 ил 1,2 к 10 В предварительно фикции рованчых эритроцитов быка. сенсибилизированных субагплютинирующеи дозой 396 антител к этим эритроцитам. Смесь последовательно подвергают следующей обработкеВысушенный мазок фиксируют 96 о этанолом при комнатной температуре и окрашивают 0,1 И раствором метиленоворо синего в течение 1-2 мин. Под мммерсионным микроскопом подсчитывают в 7 сотнях лимфоцитов порознь количество клеток, связавших не менее трех эритроцитов 4 зто Т лимфоциты с РЕ Х рецепторами.Способы прототипа и предлагаемый применены при обследовании 5 доноров (табл.). Видно, что содержание Т лимфоцитов, выявляемое обоими спосо 6 вми практически одинаково как у каждого обпледуемогоУ тек же 5 доноров определяют методом смешанного роэеткооБра 3 о ванна содержание лимфоцитов различных субпопуляции. В смешанном ро зеткообраэоеании е качестве реагента применяют смесь окрашенных ген циаиеиолетом эритроцитов Барана (12 н 10 В клеток/мл) сенсибилизированных 196 антителами е субагглютинирующеи доэе эритроцитов быка И Ед (12 д 10 8 клеток/мл) и сенсибилиэированного комплемеитом зимоэана 2 п (О 6 и). В одном случае 196 антителами сенсмбилизироеали натиеные эритроциты быка (проверка популяционной принадлежности лим Фоцитое определяемым при помощи сенсибилизированных 196 антителами натиеныж эритроцитов быка), В другом случае ш 196 антителами сенсии билизировали Фиксированные эритроциты быка (проверка популяционной принадлежности лимфоцитов, определяемых при помощи сенсибилизирован НЫК 196 ЗНТИТЕЛЗМН ФИКСИРОВЭННЫК ЭРИТРОЦИТПЕ быка). В ОЕТЗЛЬНОМ ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ЭТОГО ПРИМРЗ ПРОВБДНЛН как В СПОСПЕ ПРОТОТНПЭ В ПРИМЕ